论文部分内容阅读
免疫功能低下使动物对病原微生物的抵抗力降低，生产性能下降，是畜牧生产中的常见问题。白术、黄芪、甘草和党参是临床常用的补气中药，具有增强机体免疫功能的作用。多糖是该类中药的重要活性成分。本文分别从这四种中药提取多糖成分，将多糖和植物油混合制成油乳剂，研究注射多糖油乳剂对小鼠血清IFN-γ水平的影响，在此基础上进一步研究对IFN-γ具有显著促进作用的多糖油乳剂对口蹄疫疫苗免疫的增强作用，为中药多糖的进一步研究与开发提供参考。 1.多糖的提取分离 通过煎煮，分别从生药白术（Rhizoma Atractylodis Macrocephalae）、黄芪（RadixAstragali）、甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch）及党参(Codonopsispilosula(Franch.)Nannf）中获得提取液。用过滤、过大孔树脂柱、sevage法及透析等方法除去粗提取液中的不溶性成分、色素、蛋白质及小分子物质等杂质，最后冻干，四种多糖。用苯酚-硫酸法测定多糖含量，白术多糖(RAMPS)的纯度为89.6％;黄芪多糖(APS)的纯度为84.3％;甘草多糖(GPS)的纯度为82.7％;党参多糖(CPS)的纯度90.0％。 2.多糖及相应油乳剂对机体腹腔巨噬细胞的影响 通过碳粒廓清实验检测不同剂量RAMPS对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响，综合考虑，我们选择了1.38 mg/只作为RAMPS的使用剂量。用含3％吐温80水相与含8％司盘80油相以1∶1体积比制备浓度为1.38mg/mL的RAMPS油乳剂，在注射后第二周和第三周，注射RAMPS油乳剂小鼠的廓清指数与吞噬指数开始显著高于RAMPS水溶液组小鼠（P＜0.05），并在实验周期内都保持了较高的水平，说明RAMPS油乳剂有较强的缓释作用。 3.多糖及相应油乳剂对机体IFN-γ水平的影响 以不同剂量RAMPS水溶液腹部皮下注射小鼠，检测小鼠血清1FN-γ水平的变化。结果发现以1.38mg/只剂量组的IFN-γ水平最高(P＜0.05)，因此将1.38mg/只作为后续实验中的多糖使用剂量。以相同方法制备浓度为1.38 mg/只的RAMPS油乳剂，皮下注射该油乳剂后第二天小鼠血清IFN-γ水平即达到最高水平(479.67 pg/mL);注射后四周内，RAMPS油乳剂组的血清IFN-γ水平均显著高于RAMPS水溶液组（P＜0.05）。以相同方法制各黄芪、甘草和党参多糖油乳剂，注射小鼠并检测注射后第二天时小鼠血清IFN-γ水平的变化，结果显示三种多糖油乳剂对小鼠血清IFN-γ水平的提升效果显著高于相应的多糖水溶液(P＜0，05)。四种多糖的油乳剂比较，以RAMPS油乳剂对小鼠血清IFN-γ水平的提高作用最强。 4.RAMPS与植物油复合佐剂对O型口蹄疫抗原免疫作用影响 将灭活口蹄疫(FMD)病毒抗原分别与生理盐水、RAMPS水溶液、含或不含RAMPS的植物油制备疫苗，腹部皮下注射免疫小鼠两次，间隔三周，检测血清FMD特异性抗体及其亚类。结果表明，与生理盐水组相比，三种物质均可使小鼠血清抗体水平升高，以含RAMPS的植物油乳化剂促进抗体升高作用最为显著(P＜0.05)。RAMPS偏向于促进IgG2a水平的升高，植物油偏向于促进IgG1水平的升高。两者结合后大幅度促进了IgG1和IgG2a水平的升高。血清IFN-γ检测结果表明，只有RAMPS和含RAMPS的植物油乳化剂可促进IFN-γ显著升高(P＜0.05)，而植物油则不能。考虑到含白术多糖植物油乳剂对FMD疫苗显著免疫增强作用，它作为一种兽用疫苗佐剂值得深入研究。 综上所述，从中药白术、黄芪、甘草和党参提取出四中多糖RAMPS，APS、GPS和CPS;四种多糖制成的油乳剂注射小鼠后对血液IFN-γ的提升作用显著强于它们相应的水剂，以RAMPS油乳剂对IFN-γ的提升作用最强;含RAMPS的油乳剂对FMD疫苗具有佐剂作用，可显著增强FMD疫苗诱导的特异性免疫应答水平。