【摘 要】
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目的研究miR-188-5p靶向小泛素样修饰蛋白特异性蛋白酶3（SUMO-specific protease3,SENP3）对小鼠神经母细胞瘤（N2a）细胞氧糖剥夺/复氧复氧（OGD/R）损伤的调控作用,并探讨其机制。方法培养小鼠N2a细胞,建立OGD/R模型,随机分为五组:空白对照组（C组）、OGD/R组、OGD/R+NC组、OGD/R+转染miR-188-5p激动剂组（OGD/R+mimics
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目的研究miR-188-5p靶向小泛素样修饰蛋白特异性蛋白酶3（SUMO-specific protease3,SENP3）对小鼠神经母细胞瘤（N2a）细胞氧糖剥夺/复氧复氧（OGD/R）损伤的调控作用,并探讨其机制。方法培养小鼠N2a细胞,建立OGD/R模型,随机分为五组:空白对照组（C组）、OGD/R组、OGD/R+NC组、OGD/R+转染miR-188-5p激动剂组（OGD/R+mimics组）、OGD/R+转染miR-188-5p抑制剂组（OGD/R+inhibitor组）。C组细胞常规培养,OGD/R+NC组、OGD/R+mimics组、OGD/R+inhibitor组分别转染试剂miR-188-5p、阴性对照miR、激动剂及抑制剂后,建立OGD/R模型。检测指标:（1）双荧光酶素实验报告验证miR-188-5p和SENP3的靶向关系;（2）复糖复氧后24h检测:（1）CCK-8法检测细胞活力;（2）LDH漏出率评估细胞损伤程度;（3）采用Hoechst33258染色法观察细胞凋亡情况;（4）采用Caspase-3活力分析法评估细胞凋亡程度;（5）采用q RT-PCR测定细胞miR-188-5p及SENP3 m RNA的表达水平;（6）采用Western Blot法测定细胞SENP3的表达。结果（1）双荧光酶素实验报告表明SENP3 m RNA的3’UTR区可以与miR-188-5p特异结合,miR-188-5p的靶基因是SENP3。（2）与C组比较,其他四组的细胞活力均降低（P<0.05）,LDH漏出率增加（P<0.05）,Hoechst33258染色显示凋亡细胞数量增加,caspase-3活力增加（P<0.05）,SENP3 m RNA及蛋白表达水平上调（P<0.05）,miR-188-5p表达在OGD/R+mimics组升高（P<0.05）,其他三组下降（P<0.05）;（3）与OGD/R组相比,OGD/R+mimics组细胞活力增加（P<0.05）,LDH漏出率降低（P<0.05）,Hoechst33258染色显示凋亡细胞数量减少,caspase-3活力降低（P<0.05）,SENP3 m RNA及蛋白表达水平降低（P<0.05）,miR-188-5p表达升高（P<0.05）;OGD/R+inhibitor组细胞活力降低（P<0.05）,LDH漏出率增加（P<0.05）,Hoechst33258染色显示凋亡细胞数量增加,caspase-3活力增加（P<0.05）,SENP3 m RNA及蛋白表达水平上调（P<0.05）,miR-188-5p表达下降（P<0.05）,OGD/R组与OGD/R+NC组差异无统计学意义（P>0.05）。结论miR-188-5p负向调控SENP3减轻N2a细胞OGD/R损伤。
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