【摘 要】
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前期研究表明ATP竞争性小分子抑制剂SP600125引起有丝分裂前期阻滞而导致核内有丝分裂,可体外高效诱导鱼类细胞多倍化。在此基础上,进一步研究SP600125对鱼类发育的影响;结合SP600125能够有效阻断有丝分裂这一特性,探究利用其制备鱼类离体培养细胞和鱼类活体肾脏组织染色体标本的可行性。具体研究结果如下:1.SP600125孵育受精卵显著影响胚胎发育进程并导致胚胎高死亡率,同时伴随着畸形鱼
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前期研究表明ATP竞争性小分子抑制剂SP600125引起有丝分裂前期阻滞而导致核内有丝分裂,可体外高效诱导鱼类细胞多倍化。在此基础上,进一步研究SP600125对鱼类发育的影响;结合SP600125能够有效阻断有丝分裂这一特性,探究利用其制备鱼类离体培养细胞和鱼类活体肾脏组织染色体标本的可行性。具体研究结果如下:1.SP600125孵育受精卵显著影响胚胎发育进程并导致胚胎高死亡率,同时伴随着畸形鱼苗的发生,其中主要表现为脊椎弯曲、尾缺失等骨骼发育异常。SP600125孵育鲫鱼苗也同样导致鱼苗大量畸形,主要表现为脊柱或尾巴弯曲。2.从已有的SP600125处理组转录组学数据中调取了与骨骼发育相关的8个基因,q RT-PCR分析它们在SP600125孵育下的胚胎、鱼苗和离体培养细胞中的表达状况,结果表明:SP600125孵育会影响骨骼发育相关基因的表达,引起smad6、stat1、lef1、bmp2、twist1等基因m RNA水平显著上调。3.以鱼类的离体培养细胞为材料,用SP600125进行前期处理（SP600125预处理终浓度为50-150μmol/L、处理时长22-28 h）,经低渗、固定、滴片等操作制备染色体标本,结果显示,经SP600125进行预处理后的离体培养细胞材料的染色体制片分裂相多且染色体结构清晰、形态良好。4.以鱼类活体肾脏组织为材料,预处理时先注射PHA 3次（剂量分别为8-10μg/g、12-15μg/g、5-6μg/g,其间隔时间分别为12 h、3h）,再注射SP600125（0.8μL/g、处理时长1.5-2 h）,而后取头肾组织制备成细胞悬液,经常规低渗、固定、滴片等操作可获得图像清晰、形态好的染色体分裂相。上述相关结果为进一步调整SP600125诱导的鱼类倍性操作策略和方法提供了重要理论参考,同时也表明SP600125适用于鱼类离体培养细胞或鱼类活体组织的染色体制备,制备的染色体标本可用于染色体计数和核型分析等研究实践,为细胞遗传学研究提供了一个很好的染色体制备方法。
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