研究背景及目的：神经母细胞瘤是儿童最常见的颅外实体瘤，高危神经母细胞瘤的预后很差，继续增加化疗强度并不能提高长期生存率，同时也会增加更严重的副作用，影响了患儿的生活质量。细胞衰老是一种细胞周期停滞状态，肿瘤细胞的衰老反应可以在一定程度上暂时抑制肿瘤的发展。而且诱导细胞衰老的药物剂量比诱导细胞凋亡所需剂量低很多，也可减少药物相关副作用。miR-34a-5p与细胞衰老密切相关，它可以引起多种肿瘤细胞发生衰老，在神经母细胞瘤瘤中报道甚少。本课题主要研究miR-34a-5p在小分子AURKA抑制剂MLN8237诱导神经母细胞瘤细胞衰老中的作用及机制。
　　研究方法：以神经母细胞瘤细胞系(SK-N-SH)为研究对象，显微镜观察MLN8237及转染miR-34a-5p作用后细胞形态及体积大小的变化；运用衰老相关β-半乳糖苷酶(senescenceassociated-β-galactosidase，SA-β-gal)染色方法检测细胞衰老现象，以及流式细胞术检测细胞周期情况；用CCK-8检测各种处理下细胞增殖的改变情况。通过向细胞内转染miR-34a-5pmimic及miR-34a-5pinhibitor改变细胞中miR-34a-5p的表达水平。蛋白质免疫印迹(Western Blot)方法用来检测MLN8237作用后或miR-34a-5p转染细胞后相关蛋白水平的表达情况，RT-PCR用来检测细胞中相关基因的表达情况。
　　结果：
　　1.0.5μmol/L的MLN8237作用于神经母细胞瘤SK-N-SH细胞72小时后，CCK-8结果显示细胞增殖受到明显抑制，显微镜下观察到细胞体积变大，β-半乳糖苷酶染色实验显示细胞蓝染，且流式细胞术分析结果显示MLN8237可以引起明显的G2/M期周期阻滞，即MLN8237可以引起SK-N-SH细胞衰老。
　　2.0.5μmol/L的MLN8237作用于SK-N-SH细胞后在不同时间点收集蛋白，通过Westernblot检测显示MLN82327可以通过抑制AURKA的磷酸化而抑制其活性；而MLN8237在诱导SK-N-SH细胞衰老中，PTEN/P27、RB/P16通路蛋白并无明显上调，但会引起P53、P21蛋白及mRNA表达上调，激活P53/P21衰老通路。
　　3.RT-PCR检测显示在MLN8237诱导SK-N-SH细胞衰老过程中会引起miR-34a-5p表达的升高，及其靶向抗衰老基因SIRT1表达下调；在SK-N-SH细胞中过表达miR-34a-5p后通过β-半乳糖苷酶染色发现细胞体积变大、蓝染明显，且流式细胞术分析显示miR-34a-5p过表达会使G2/M期细胞明显增多，即miR-34a-5p可以引起SK-N-SH细胞衰老。
　　4.在SK-N-SH细胞中通过细胞转染改变miR-34a-5p表达水平，可在mRNA及蛋白水平调控衰老相关靶基因SIRT1的表达；miR-34a-5p过表达可以引起P53、P21表达上调，激活P53/P21衰老通路，PTEN/P27、RB/P16通路蛋白并无明显上调，反之则引起P53、P21表达下调。
　　5.MiR-34a-5p抑制剂与MLN8237联用，与MLN8237单用相比，会使P53、P21表达相对降低，即拮抗MLN8237引起的P53/P21通路的激活；β-半乳糖苷酶染色也显示会减弱MLN8237引起的细胞衰老；且CCK-8结果也显示两者联用可缓解MLN8237的细胞增殖抑制作用。RT-PCR检测发现过表达miR-34a-5p与MLN8237联用，P53、P21上调比单用MLN8237更加明显，而CCK-8结果也显示两者联用后对抑制细胞增殖有协同作用。说明MLN8237是通过上调miR-34a-5p引起SK-N-SH细胞衰老的。
　　结论：在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞中MLN8237激活P53/P21衰老通路，P53的上调导致miR-34a-5p表达升高，从而靶向下调抗衰老基因SIRT1的表达，而SIRT1的降低又可使P53降解减少，以此形成反馈环路，参与MLN8237诱导的细胞衰老，且miR-34a-5p和MLN8237联用可以增强对神经母细胞瘤的抑制作用。