肝能滴丸(Ganneng Dripping Pills,GDP)是由藏药波棱瓜子的有效部位——波棱总木脂素(the total lignans of Herpetospermum caudigerum,TLHC)作为原料制成的滴丸剂,具有清利湿热、清热解毒的功效,能够保肝降酶、抑制乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)的复制,主治慢性肝炎。现代研究表明,TLHC能明显下调转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达,能显著降低透明质酸(HA)和羟脯胺酸(HYP)的含量,抑制肝纤维的合成与沉降,具有良好的抗肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)的作用。肝能滴丸现有的质量控制仅以薄层鉴别和herpetrione定量测定为主,检测指标单一,不能全面控制肝能滴丸的质量,保证药效。课题组前期建立了同时检测波棱瓜子药材中7种木脂素类成分的HPLC方法,但是由于对照品缺乏、制备困难等原因未能得到推广。近年来,指纹图谱与一测多评法(quantitative analysis of multi-components by single-marker,QAMS)的结合,不仅能全面反映药物质量,还能通过单一对照品实现多成分同时测定,有效的解决了对照品昂贵、匮乏的问题,具有便利、快速、廉价等特点,已经被普遍应用于多种中药。本论文以肝能滴丸质量标准的研究为目标开展以下研究:首先,采用高压制备法对肝能滴丸有效部位TLHC进行分离纯化,采用面积归一化法对纯化后样品进行纯度检测,并通过UV、IR、NMR、MS等数据对获得的单体成分进行鉴定。从TLHC中制备8个化合物,经鉴定分别是dehydrodiconiferyl alcohol(BLG-3)、herpetotriol I(BLG-4)、herpetolide A(BLG-5)、herpetrione(BLG-6)、herpetin(BLG-7)、herpetetrone(BLG-10)、herpetone(BLG-11)、herpetenone(BLG-12),其中herpetotriol I为新化合物。其次,对肝能滴丸质量标准的研究。以herpetrione为指标成分,采用TLC进行定性鉴别,可见供试品与对照品在相同的位置上有同种颜色的斑点,而阴性样品无干扰。根据《中国药典》2015年版四部通则0108丸剂项下相关要求,对肝能滴丸进行重量差异、溶散时限和微生物限度的检测,检测结果均达到药典要求。以herpetrione为内参物,建立同时测定8个成分(dehydrodiconiferyl alcohol、herpetotriol I、herpetolide A、herpetrione、herpetin、herpetetrone、herpetone、herpetenone)的QAMS定量测定方法,并对5批肝能滴丸进行检测,方法稳定可靠。建立了肝能滴丸指纹图谱,通过《中药色谱指纹图谱相似度评价软件》,对5批肝能滴丸指纹图谱进行相似度分析,采用中位数生成5批肝能滴丸指纹图谱的共有模式,并确定了14个共有峰,经过与对照品的对比,指认出8个成分,5批肝能滴丸相似度均在0.99以上。最后,根据肝能滴丸含量测定结果,选择含量较高的herpetrione和herpetone作为研究对象,采用CCK-8法检测不同浓度的herpetrione、herpetone对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)不同处理时间的影响,并采用流式细胞术对HSC-T6的凋亡率进行检测。结果表明,herpetrione、herpetone对HSC-T6增值抑制作用明显,呈浓度与时间依赖性;细胞凋亡率分别随着herpetrione、herpetone浓度的增加而增大。说明herpetrione和herpetone具有抗肝纤维化的作用。