论文部分内容阅读
目的: miR-21在参与细胞中多种过程，通过抑制靶基因的表达来影响肿瘤的发生发展。在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中，它的作用机制仍不清楚，尚无关于miR-21和DLBCL细胞表型之间关系的报道。本实验旨在研究ABC-型DLBCL中能否通过miR-21对PDCD4及PTEN两种基因的调控来影响肿瘤的增殖、侵袭能力和凋亡。探讨以miR-21作为靶分子，对DLBCL基因治疗的可能性。 研究方法: 1)采用QRT-PCR比较ABC-type及GCB-type中miR-21的表达水平; 2)采用荧光素酶报告实验直接证明PDCD4及PTEN是miR-21靶基因; 3)转染OCI-LY3及OCI-LY10后，运用QRT-PCR检测OCI-LY3及OCI-LY10miR-21含量的改变; 4)采用QRT-PCR法和Western blot法分别检测转染细胞中PDCD4和PTENmRNA和蛋白表达的变化; 5)采用MTT法检测转染后OCI-LY3、OCI-LY10细胞增殖水平的变化; 6)采用Transwell法检测转染后对OCI-LY3、OCI-LY10细胞的体外侵袭能力的影响; 7)采用流式细胞术检测转染后对OCI-LY3、OCI-LY10细胞的凋亡的影响; 结果: 1)QRT-PCR结果表明ABC-型DLBCL中miR-21的表达明显高与GCB-型DLBCL; 2)荧光素酶报告实验证明了PDCD4及PTEN是miR-21靶基因; 3)QRT-PCR法和Westem blot法显示转染后随着细胞中miR-21的量的减少，PDCD4和PTEN的蛋白表达明显降低，但PDCD4和PTEN的mRNA的量变化不明显; 4)MTT结果显示，在转染24h、48 h、72 h和96 h后，OCI-LY3/anti-miR-21细胞在48h、72h和96h的增殖能力较OCI-LY3/inhibitor control分别下降至87％(P＜0.01),85％(P＜0.01),77％（P＜0.01）; OCI-LY10/anti-miR-21细胞在48h、72h和96h的增殖能力较OCI-LY10/inhibitor control分别下降至71％(P＜0.01),73％(P＜0.01),67％（P＜0.01）; 5)细胞体外侵袭力测定结果显示:OCI-LY3/anti-miR-21及OCI-LY10/anti-miR-21组中穿膜细胞的数目分别是OCI-LY3/inhibitor control及OCI-LY10/inhibitor control组的71％(P＜0.05)和60％(P＜0.05) 6)流式细胞术显示:OCI-LY3/anti-miR-21及OCI-LY10/anti-miR-21组细胞的凋亡显著高于OCI-LY3/inhibitor control及OCI-LY10/inhibitor control组。 结论: RNA沉默技术特异性降低OCI-LY3和OCI-LY10细胞miR-21表达后，细胞增殖、侵袭能力受到明显抑制，凋亡增加，说明miR-21能促进OCI-LY3和OCI-LY10细胞的生长。说明miR-21与DLBCL的进展相关，可能为一种新的DLBCL治疗靶分子。