【摘 要】
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缺血性中风（ischemic stroke,IS）是常见的脑血管疾病之一,具有死亡率高、致残率高、复发率高等特点。IS的病理机制十分复杂,涉及兴奋性氨基酸毒性、氧化应激、炎症反应、细胞凋亡和自噬等多种病理生理学过程,其中炎症反应贯穿于IS发生发展的全过程。中医认为,中风患者病位在脑,病机关键是脉络阻塞、气虚血瘀。补阳还五汤（buyang huanwu decoction,BHD）由黄芪、赤芍、川芎
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缺血性中风（ischemic stroke,IS）是常见的脑血管疾病之一,具有死亡率高、致残率高、复发率高等特点。IS的病理机制十分复杂,涉及兴奋性氨基酸毒性、氧化应激、炎症反应、细胞凋亡和自噬等多种病理生理学过程,其中炎症反应贯穿于IS发生发展的全过程。中医认为,中风患者病位在脑,病机关键是脉络阻塞、气虚血瘀。补阳还五汤（buyang huanwu decoction,BHD）由黄芪、赤芍、川芎、当归、桃仁、红花、地龙七味药组成,是治疗IS的经典方剂,具有益气活血、祛瘀通络的功效,在临床治疗中取得了肯定的疗效。趋化因子（chemotactic factor,CF）是一类具有白细胞化学趋化作用的小分子蛋白质,在多种炎症性疾病和自身免疫性疾病中发挥着重要作用。CCL20是CF家族的一员,主要由各种炎症相关细胞分泌。CCL20的唯一受体是CCR6,二者能够特异性结合。研究发现,CCL20/CCR6轴在IS的炎症级联反应中有重要作用。本研究拟从CCL20/CCR6轴出发,探索BHD对IS模型的影响并研究潜在的干预机制,为经典古方BHD的疗效机制提供新的实验支持。目的:通过建立大鼠大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型,研究BHD对MCAO大鼠的保护作用,并初步探索其可能的分子机制;原代培养星形胶质细胞,探索BHD对拟缺血损伤星形胶质细胞的作用。方法:1.将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、BHD组、依达拉奉（阳性药）组,除假手术组外,其余各组均建立右侧MCAO模型。采用改良的Berderson评分法对MCAO大鼠进行神经功能评分;用苏木素-伊红（Hematoxylin-Eosin,HE）染色法观察各组大鼠脑组织病理形态学变化;用TTC染色法检测各组大鼠脑梗死体积。观察各组大鼠造模后的生理状态,动态监测其体重变化并计算肝脏、脾脏以及肾脏的脏器指数。2.采用Western blot法分析各组大鼠缺血侧大脑皮质中CCL20、CCR6、IL-17、pAKT、AKT、pSTAT3、STAT3 的表达。3.原代培养星形胶质细胞并进行免疫荧光鉴定。将星形胶质细胞分为正常组、模型组和不同浓度的BHD组,模型组和BHD组采用氧糖剥夺（oxygen glucose deprivation,OGD）法建立拟缺血损伤模型。通过MTT法检测各组星形胶质细胞的活性;采用Western blot法检测各组星形胶质细胞CCR6和IL-17的表达变化。结果:1.神经功能评分显示,与模型组相比,BHD组和依达拉奉组的神经功能损伤明显减轻（P＜0.01,P＜0.05）。HE染色结果显示,模型组的脑组织呈现明显的病理性损伤,BHD组和依达拉奉组相较于模型组有较明显改善。TTC结果显示,与模型组相比,BHD组和依达拉奉组大鼠脑梗死体积明显减少（P＜0.05）。2.体重和脏器指数结果显示,除假手术组,各组造模大鼠体重均持续下降（P＜0.01）;与假手术组相比,模型组大鼠的肝脏和脾脏的脏器指数显著减小（P＜0.01）,与模型组相比,BHD组肝脏和脾脏的脏器指数显著上调（P＜0.05,P＜0.01）。3.Western blot结果显示,与模型组相比,BHD组和依达拉奉组缺血侧脑皮质中CCL20、CCR6、IL-17、pSTAT3 表达明显下降（P＜0.01）,pAKT 表达增多（P＜0.01,P＜0.05）。4.MTT结果显示,OGD造模后,模型组星形胶质细胞活性相较于正常组显著降低（P＜0.01）,BHD干预后各组星形胶质细胞活性随着药物浓度增加呈现先逐渐升高后降低的趋势,细胞形态也有所改善。5.Western blot结果显示,与正常组相比,模型组星形胶质细胞CCR6和IL-17的表达显著增加（P＜0.01）,BHD各组星形胶质细胞CCR6和IL-17的表达随着药物浓度增加均呈逐渐降低趋势（P＜0.01）。结论:BHD具有神经保护作用,可改善MCAO大鼠神经功能和病理损伤,降低脑梗死体积,其作用可能与干预CCL20/CCR6轴调控IL-17的表达有关;BHD能降低OGD损伤的星形胶质细胞CCR6和IL-17的表达,对星形胶质细胞具有明显的保护作用。
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