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目的:肠炎型沙门菌(Salmonella enterica serovar Enteritidis,S.Enteritidis)是唯一可在蛋清中生存的沙门菌血清型,其在禽蛋中生存能力对其传播感染起重要作用,使肠炎沙门菌成为引起人类沙门菌病的主要病原。肠炎沙门菌与其他血清型并无太多基因组上的差异,其在蛋清中生存的特性至今尚未弄清可能与其基因表达调控的不同所至。sRNA(small noncoding RNA)是近年发现的新的基因表达调控因子,在转录后水平调控基因表达,在生物体的应急、适应性方面起重要作用。本课题研究了沙门菌功能sRNA SraB与蛋清及蛋清中各种抑菌因子的关系,以寻找肠炎型沙门菌在蛋清中生存的机理。 方法:本课题运用Red重组系统(red recombination system)敲除肠炎沙门菌SE2472的SraB基因,构建sRNA SraB敲除株(SE2472△SraB);并构建可在正常培养条件下低转录sRNA SraB的回复质粒pHDB3-SraB,以回复SE2472△SraB表型的缺陷。课题研究了SraB敲除株(SE2472△SraB)和野生型SE2472对抗蛋清抑菌能力的差异,及蛋清中抑菌因子溶菌酶和转铁蛋白对SraB缺陷株的影响,并运用回复质粒验证实验结果。 结果:实验成功构建了SE2472△SraB及回复质粒pHDB3-SraB。研究发现,敲除株在蛋清存活率为野生型的61-70%,回复株的存活率比敲除株提高25%;在转铁蛋白抑菌实验中,孵育8h和24h,敲除株的存活率分别为野生型存活率的38%和23%,孵育8h后回复株的存活率比敲除株提高15%,24h回复株的存活率有所下降;在溶菌酶抑菌实验中,孵育8h和24h后,敲除株的存活率分别野生型存活率的41%和27%,回复株的存活率分别比敲除株提高35%和23%。 结论:肠炎型沙门菌sRNA SraB与其在禽蛋中的存活有关,可通过调节细菌抵抗蛋清中溶菌酶抗菌作用,增加肠炎型沙门菌在蛋清中的存活几率。