背景抗体从多克隆发展到单克隆抗体药物,已被广泛应用于生物科学及医药研发技术产品中。相比鼠单克隆抗体而言,兔单克隆抗体具有高亲和力,特异性强,易于人源化等优点。n-甲基-d-天冬氨酸受体(NMDARs)是压力敏感型和配基偶联的钙离子通道,并在突触可塑性、学习记忆以及神经紊乱等方面扮演重要角色,作为一种独特的双重门控通道(doubly gated channel),它既受膜电位控制也受其它神经递质控制。该受体被激活后,主要对Ca2+有通透性,介导持续、缓慢的去极化过程。目前市面上主要是NMDAR2B的多克隆抗体,且其特异性和亲和力并不是十分理想。目的制备NMDAR2B兔单克隆抗体。方法本实验设计合成了一段NMDAR2B多肽,YCA-13436多肽免疫三只实验兔。经过血清blot实验初步筛选,将可能免疫了NMDAR2B兔脾细胞与240E兔骨髓瘤样细胞株融合,产生能分泌NMDAR2B抗体的兔-兔杂交瘤细胞,用HAT作为选择性培养基对融合后的细胞进行培养,运用ELISA法和WB法,筛选获得阳性克隆,选取其中WB信号最强的克隆进入抗体质粒重组阶段,再进一步筛选,选取分泌单克隆抗体最强的配对进入单克隆抗体大转生产。结果YCA-13436的H1332号兔子免疫效果较佳,并进入融合开发抗体,所得重组37-d抗体在多种裂解液中检出特异性目的条带,并能特异性地识别磷酸化蛋白而不能识别非磷酸化蛋白。结论本实验共设计一段NMDAR2B的磷酸化氨基酸序列,编号是YCA-13436,免疫实验兔后,通过ELISA和WB方法,细胞杂交瘤技术以及重组抗体技术,获得YCA-13436-37-d的NMDAR2B兔单克隆抗体,特异性地识别磷酸化抗体,WB结果良好,满足检测需要,有潜在应用前景。