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肠道病毒71型(EV71)是引起婴幼儿手足口病的主要病原体之一,其感染可导致中枢神经系统疾病,约90%的手足口重症病例均由EV71引起。目前EV71的致病机制尚不完全清楚,研究表明其感染后引起免疫系统的功能障碍与其致病机制相关。前期研究发现,干扰素可以抑制EV71在小鼠中的复制,EV71编码3C蛋白可以抑制干扰素的产生,但其具体机制尚不完全清楚。本文对EV713C蛋白对天然免疫的TLR3 (Toll-like receptor 3)信号通路的抑制作用和病毒对细胞凋亡的调控作用进行了研究,并进一步阐明了其作用的分子机制。结果显示,3C蛋白可以切割TLR3信号通路的效应分子p干扰素TIR结构域衔接蛋白(TIR-domain-containing adapter-inducing interferon-β, TRIF)并抑制其诱导的IFNβ和NF-κB启动子的激活。鉴于病毒感染后引起TRIF切割的机制一方面由病毒蛋白酶活性引起,另一重要原因是病毒感染引起半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)的激活,激活的Caspase引起TRIF切割。进而通过Caspase抑制剂Z-VAD抑制实验及TRIF中Caspase切割位点突变实验,发现3C蛋白诱导的TRIF切割并不依赖于Caspase。3C蛋白酶活性位点的突变实验,发现3C蛋白酶活性是TRIF切割所必需的。最后通过缺失突变和点突变的方法精确定位了3C蛋白在TRIF上的切割位点为Q312S313。所以EV71感染下调TLR3信号通路中的TRIF表达可能是其抑制Ⅰ型干扰素产生的原因之一。病毒感染后,机体除了通过产生干扰素来抑制病毒繁殖复制,还可以通过凋亡的方式来抑制病毒入侵,但是同时细胞凋亡也是病毒致病的主要机制之一。结果显示,EV71感染RD细胞可以明显的抑制细胞增殖,而这种抑制作用是由细胞凋亡引起的,因为通过检测凋亡相关的重要蛋白,发现EV71感染可以引起Caspase3、8的激活,并且Caspase3底物PARP也可以被切割,说明EV71感染RD细胞引起caspase依赖的细胞凋亡。在细胞凋亡过程中凋亡蛋白Bax起着重要的作用,EV71感染RD细胞后不仅可以检测到Bax蛋白表达的上调,还可以检测到Bax构象变化,进一步引起凋亡,说明Bax在EV71诱导的凋亡中起着重要作用。综上所述,EV713C蛋白可通过切割TRIF来拮抗TLR3信号通路中干扰素的产生,有关结果揭示了EV71抑制宿主天然免疫的另一机制。EV71感染RD细胞可以诱导Caspase和Bax依赖的细胞凋亡。这些结果为阐明EV71的致病机理提供了线索。