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目的：观察食管癌细胞经放射线反复照射后放射敏感性的变化；探讨重组人源化表皮生长因子受体单克隆抗体（hR3）、重组腺病毒-p53抗癌注射液（SBN-1）单独及联合应用对不同放射敏感性食管癌细胞的作用。方法：1.具有放射抗拒性的食管癌细胞TE13R120的树立。TE13R120是TE13经反复γ射线照射（累积剂量120Gy）及逐步筛选后产生的。相差显微镜下及HE染色观察TE13及TE13R120的形态学差异；应用细胞克隆形成实验验证TE13及TE13R120两种细胞的不同放射敏感性；用流式细胞术观察分析γ射线照射对两种不同放射敏感性细胞的细胞周期分布的影响。2.观察hR3、SBN-1单独和联合应用对TE13及TE13R120两种细胞的作用。应用免疫组化技术检测TE13及TE13R120的表皮生长因子受体（EGFR）的表达；用MTT法测定hR3、SBN-1及两药在间隔0h、6h、12h、24h各给药组对TE13及TE13R120的生长抑制情况及对细胞生长的影响；采用流式细胞术检测两种药物联合作用时对TE13、TE13R120细胞周期分布的影响及对Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。结果：1.食管癌细胞TE13经放射线反复照射至120Gy后放射敏感性发生变化，形成具有放射抗拒性的食管癌细胞TE13R120。1.1TE13及TE13R120形态学的差异：相差显微镜<WP=4>下可见正常生长的两种细胞呈单层、多边形贴壁生长。TE13细胞之间界限不够清楚，呈片状生长；而TE13R120细胞轮廓较清晰，形态不规则，呈梭形或纺锤形。HE染色可见TE13呈圆或椭圆形，胞浆丰富；TE13R120较TE13胞浆少，胞浆染色深。1.2TE13及TE13R120生长动力学差异：TE13R120的细胞群体倍增时间为39.93h，长于亲代TE13（33.94h）。1.3TE13及TE13R120放射敏感性的差异：TE13的接种效率为38.17±7.65%，TE13R120的接种效率为47.67±5.84%。TE13及TE13R120的放射敏感性明显不同（D0值分别为1.29，2.31Gy，SF2值分别为0.50，0.63）。1.4两种细胞经4Gy放射线照射后细胞周期分布的变化：自然状态下TE13 G0/G1、S、G2/M各期细胞百分数分别为57.89±11.56%、23.97±6.31%、18.14±5.25%，TE13R120 G0/G1、S、G2/M各期细胞百分数分别为71.77±6.54%、13.22±2.18%、15.12±4.54%。TE13增殖指数为42.11±11.56%，TE13R120增殖指数为28.35±6.72%。TE13及具有放射抗拒性的TE13R120在受到4Gy放射线照射后，两者出现不同的细胞周期分布改变，对放射线相对敏感的TE13在照射后12～24h出现了G1期阻滞，这种阻滞作用在12h时表现的最为明显，48h细胞周期恢复到自然状态。而TE13R120在受照射后细胞周期的分布变化不大，仅在受照射后出现了轻度的G2期阻滞，在24h时表现的最为明显。2.观察hR3、SBN-1单独及联合对不同放射敏感性食管癌细胞的作用。2.1经免疫组化染色，TE13及TE13R120细胞的EGFR表达均为阳性（TE13和TE13R120的EGFR表达均为+++）。2.2hR3、SBN-1单独、联合应用及间隔不同给药时间对TE13<WP=5>及TE13R120细胞的增殖抑制作用：hR3、SBN-1及间隔不同给药时间组均对两种细胞增殖产生抑制作用，与阴性对照组比较有显著性差异（P<0.05），同期给药组（hR3+SBN-1）对TE13和TE13R120细胞的抑制作用明显，抑制率分别为77.93±3.81%、86.09±4.35%，高于hR3单药组和SBN-1单药组。两药联合对TE13R120的增殖抑制作用高于TE13，但两者相比无显著性差异。先给SBN-1间隔6、12、24h后给hR3各组抑制率高于先给hR3间隔6、12、24h后给SBN-1各组，但无显著性差异（P>0.05）。3.细胞周期及凋亡的分析。hR3与SBN-1同时作用后12h，对TE13细胞产生明显的G1期阻滞（70.68±3.61%），与对照组相比有显著性差异（P<0.05）而S期细胞显著减少（P<0.05）。而对TE13R120可产生轻度的G1期阻滞，与对照组相比无显著性差异（P>0.05）。TE13及TE13R120在正常生长情况下凋亡率分别为5.20±0.92％、4.60±1.40％，给予4Gy剂量照射后12h，两种细胞的凋亡率有所增高，分别为5.30±0.55％、5.40±0.10％，hR3与SBN-1同时作用后12h，凋亡率为5.63±0.57％、4.93±0.25％，与对照组及照射组相比均无显著性差异（P>0.05）。为了进一步观察两种药物对凋亡的影响，我们检测了凋亡关键蛋白Bax和Bcl-2的表达。由Table 4可见，TE13及TE13R120在正常生长情况下Bax表达相似，给予hR3和SBN-1共同作用12h后，Bax表达有所增高，无显著性差异（P>0.05）；Bcl-2在两种细胞正常生长时都有较高表达，给予hR3和SBN-1共同作用12h后，其表达减少，无显著性差异（P>0.05）。结论：1.食管癌细胞TE13经放射线反复照射后放射敏感<WP=6>性发生了变化，形成具有放射抗拒性的细胞TE13R120。2.放射线照射对TE13及TE13R120细胞周期分布的影响明显不同。照射4Gy后12～24h，TE13出现明显的G1期阻滞，这种阻滞作用在照射后12h达高峰；TE13R120照射后各时相细胞比率无明显变化，表现出较高的放射抗拒性。3.hR3与SBN-1联合应用对不同放射敏感性的食管癌细胞产生了增殖抑制作用，且这种增殖抑制作用对具有放射抗拒性的细胞TE13R120更明显。4.hR3与SBN-1联合作用后12h使细胞周期发生了G1期阻滞；同时有可能通过促使TE13及TE13R120细胞凋亡的作用，抑制细胞增殖，其具体机制有待于进一步研究。