益智仁改善记忆和缩尿功效的活性成分研究

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益智仁(Alpinae Oxyphyllae Fructus,AOF)是中药益智(Alpinae Oxyphyllae Miq.)的成熟干燥果实,具有提高学习记忆能力、温肾缩尿、保护神经、抗氧化、抗衰老等广泛而重要的生物学功能。益智仁成分复杂,目前关于其化学成分与药理活性的研究报道较多,而针对其活性成分的研究报道较为少见。本文在前人研究基础上探究了益智仁改善记忆和温肾缩尿这两大主要药理作用与活性成分之间的关系,意在为益智仁的进一步开发利用提供理论依据和技术支撑。本文对益智仁进行了如下研究:(1)益智仁提取物各粗组分改善小鼠记忆和缩尿作用的活性研究。益智仁经不同溶剂提取、萃取等处理,依次得到益智仁水提醇沉物(A)、益智仁水提醇溶物(B)、乙酸乙酯萃取物(C)、正丁醇萃取物(D)及萃取剩余物(E);利用小鼠水迷宫和跳台模型探究各粗组分改善小鼠记忆的活性作用,结果表明:益智仁水提醇沉物(A)能显著改善小鼠记忆(P<0.01或P<0.05),说明该部分含有改善记忆的活性物质;同时通过小鼠缩尿试验,筛选得出益智仁乙酸乙酯萃取物(C)能在短期内快速对尿量的产生起到抑制作用(P<0.01或P<0.05),表明该粗组分中含有缩尿活性成分。(2)益智仁水提醇沉物细分组分的分离鉴定与改善记忆的活性探究。组分A通过大孔树脂、离子交换柱等色谱分离手段得到组分L、M、N;利用水迷宫和跳台试验探究组分L、M、N改善小鼠记忆活性,及各组分对脑海马AchE和ChAT活力的影响。检测发现:组分L能显著改善小鼠记忆;同时L组小鼠脑海马中AchE活力显著减弱,ChAT活力显著增强(P<0.01或P<0.05);说明改善记忆的活性物质存在于组分L中。将组分L依次通过HW-55F、Sephacryl S-400凝胶柱反复纯化,最终得到组分L11,根据NMR等光谱数据分析其结构,得到多糖化合物L11,并推测其含有主链(1→2)-β-葡萄糖异构体构型。(3)益智仁乙酸乙酯萃取物细分组分的分离鉴定与缩尿的活性探究。将组分C经过MCI色谱柱分离,依次得到组分P1、P2、P3和P4;对各组分进行小鼠缩尿活性试验筛选,结果表明P3和P4组尿量/体重均出现下降趋势,P4组效果更显著(P<0.01或P<0.05),说明P3、P4组中均含有具有缩尿功效的成分。将组分P3和P4合并,依次经ODS-A和ODS-D色谱柱进行反复纯化,最终得到四种化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ,经运用NMR等波谱方法进行结构分析,分别鉴定为3-甲氧基-4羟基-二苯己烷、油酸、亚油酸、20-丙基-β-谷甾醇。并推断3-甲氧基-4羟基-二苯己烷和20-丙基-β-谷甾醇为益智仁中有缩尿作用化合物。
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