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目的:建立宫颈鳞癌细胞HCE1多细胞球体浸润人脐静脉内皮细胞HUVEC模型,初步探讨多细胞球体中整合素β1的表达与浸润内皮细胞的关系,以及抗整合素β1单克隆抗体P5D2对HCE1多细胞球体浸润血管内皮细胞的作用。方法:(一):建立宫颈鳞癌细胞HCE1多细胞球体浸润单层人脐静脉内皮细胞系HUVEC模型(以下均简称宫颈鳞癌HCE1浸润模型):将HCE1多细胞球体与HUVEC细胞共同培养,在模型建立的第0,1,4,7天分别用倒置显微镜拍摄HCE1多细胞球体浸润单层HUVEC细胞的程度。用Motic med数码医学图像分析系统软件计算处理HCE1多细胞球体浸润的范围。(二):免疫细胞化学SABC法检测HCE1单层细胞、HCE1多细胞球体以及HUVEC细胞中整合素β1的表达。(三):P5D2对HCE1多细胞球体浸润血管内皮细胞的作用1.分组:干预组P5D2终浓度为1ug/ml,对照组为等浓度的mIgG。2.观察:在模型建立的第0,1,4,7天分别用倒置显微镜拍摄两组模型中HCE1多细胞球体浸润单层HUVEC细胞的程度。用Moticmed数码医学图像分析系统软件计算处理两组模型中HCE1多细胞球体浸润的范围。3.免疫细胞化学SABC法检测P5D2干预宫颈鳞癌HCE1浸润模型后和对照组第4天整合素β1表达。结果:(一)宫颈鳞癌HCE1浸润模型的建立。1.HCE1单层细胞培养:显微镜下见细胞生长状态良好,细胞胞浆透亮,细胞贴壁后呈不规则对角形。2.HCE1多细胞球体培养:HCE1细胞旋转培养24小时可见细胞聚集成团,并随培养时间的延长,结构更加紧密,直径逐渐增大,培养至第4天开始出现坏死核心。3.HUVEC细胞培养:胞体呈多角形,相互嵌合,为单层呈铺路石状排列。4.宫颈鳞癌HCE1浸润模型:倒置显微镜下观察7天,在镜下能很明显的区分HCE1多细胞球体和HUVEC单层细胞,将宫颈鳞癌HCE1多细胞球体与人脐静脉内皮细胞HUVEC共同培养1小时,镜下见HCE1多细胞球体紧密粘附于HUVEC单层细胞上,摇之不动,但不在一个焦距平面。宫颈鳞癌HCE1浸润模型建立第1天,镜下见HCE1多细胞球体出现解聚,向周围HUVEC细胞扩散。第4天,镜下见HCE1多细胞球体侵入HUVEC细胞,替代HUVEC细胞退缩的部位,形成侵袭聚集点,中间可见坏死核心,周围可见单层HCE1细胞生长晕,HCE1多细胞球体与HUVEC细胞呈同一聚焦平面。第7天,镜下见HCE1多细胞球体占据面积更大,边界与HUVEC细胞融合欠清。(二):免疫细胞化学SABC法检测整合素β1的表达:HCE1多细胞球体中整合素β1阳性高表达率高于HCE1单层细胞,经统计学分析两组比较差异有显著性(Pearson X~2=19.20,P＜0.005),HUVEC细胞中整合素β1阴性表达。(三):P5D2对HCE1多细胞球体浸润血管内皮细胞的作用1.P5D2干预后宫颈鳞癌HCE1浸润模型:倒置显微镜下观察7天,药物干预后的模型浸润程度明显小于对照组,P5D2干预后第1天,镜下见HCE1多细胞球体解聚,浸润面积稍小于mIgG组,降低了32.16%,经统计学分析两组差异有显著性(p＜0.001)。第4天镜下与mIgG组相比,浸润面积明显降低,达60.77%,经统计学分析两组差异有显著性(p＜0.001)。第7天镜下与mIgG组相比,浸润面积经P5D2阻断更显著,较对照组降低了84.68%,经统计学分析两组差异有显著性(p＜0.001)。2.免疫细胞化学SABC法检测P5D2干预宫颈鳞癌HCE1浸润模型后第4天整合素β1表达:对照组整合素β1的阳性高表达率高于P5D2干预后宫颈鳞癌HCE1浸润模型,经统计学分析两者比较差异有显著性(Pearson X~2=21.69,P＜0.005)。结论:1成功建立HCE1多细胞球体浸润单层人脐静脉内皮细胞HUVECC模型。2整合素β1在多细胞球体、浸润模型中的表达上调可能与细胞粘附力、侵袭力增强有关。3抗整合素β1单克隆抗体P5D2能够部分阻断HCE1多细胞球体对单层人脐静脉皮HUVEC细胞的浸润。