论文部分内容阅读
2014年我国红枣产量大幅提高，约为734.53万吨，但红枣主产区却面临着不同程度的红枣滞销，给农民带来了严重损失。红枣浓缩汁加工是延长红枣产业链，提高枣产业效益的主要途径之一，但由于红枣富含果胶，制汁过程需要使用果胶酶，而目前国内缺少针对红枣果胶性质开发的果胶酶，大型果品加工企业使用的果胶酶是进口法国的用于加工浓缩苹果汁的酶制剂，不适合处理红枣果实，导致果汁超滤困难，成为限制红枣浓缩汁工业化生产的瓶颈。为针对红枣果胶性质开发适合红枣浓缩汁生产的果胶酶，本研究以阜平大枣为原料，制备红枣果胶，研究其理化性质、单糖组成及与商品果胶的区别，并以枣园里的土壤和腐烂枣作为筛选菌株的来源，利用红枣果实中提取的果胶作为唯一的碳源进行初筛，再利用酶活测定法进行复筛，得到果胶酶产酶活力高的菌株，并对其进行分子生物学鉴定，主要研究结果如下: 1.以阜平大枣为原料，采用超声波辅助盐酸提取、乙醇沉淀法获得红枣果胶，并对红枣果胶和商品果胶进行理化分析。结果表明:红枣果胶符合果胶的表观特征;红枣果胶总灰分为4.25％，灰分中盐酸不溶物含量为1.0％，水分含量为7.06％，溶解度为79.2％，酯化度为54.90％，pH为2.7，透明度为62.72％，半乳糖醛酸含量为70.13％。红枣果胶的色差值为:L*=32.48±0.10、a*=13.51±0.09、b*=15.07±0.11。红枣果胶和商品果胶的明显不同是红枣果胶属于高甲氧基果胶，商品果胶属于低甲氧基果胶;红枣果胶属于高酯果胶，商品果胶属于低酯果胶。 2.对红枣果胶和商品果胶的单糖组成进行分析。红枣果胶和商品果胶都是由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和半乳糖醛酸等组成的杂多糖，红枣果胶和商品果胶在单糖组成上无明显不同;红枣果胶中含有乙酰基，商品果胶中不含有乙酰基;红枣果胶和商品果胶的红外图谱基本一致，说明红枣果胶具有典型的果胶红外吸收;红枣果胶和商品果胶呈片状结构，上面附着大小不等的颗粒状聚集体，大小在0.1～1.5μm范围内。 3.以红枣果胶为唯一碳源，从保定市阜平县采集的腐烂红枣、土壤等中筛选、分离纯化出一株高产红枣果胶酶的菌株。该菌株编号为M3，该菌株在30℃，摇床转速为160r/min条件下的PDB种子培养基中培养24h后，接种于同等培养条件下的基础培养基后，培养96h后，其果胶酶活性可达941.15U/mL。采用CTAB法提取其基因组总DNA，利用真菌的通用引物ITS1和ITS4扩增菌株的rDNAITS区序列，扩增产物纯化后进行测序。将测序结果在GenBank中进行同源性搜索，并下载部分具有代表性菌种的ITS序列，利用软件MEGA6构建系统发育树，通过序列分析，该菌株鉴定为白地霉(Galactomyces candidum)。该菌株的ITS序列基因已登录GenBank，登录号为:KP399955。