不同拷贝数CArG/5HRE+HSV-TK系统辅助伽玛刀杀伤C6胶质瘤的实验研究

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目的:研究不同拷贝数CArG/5HRE+HSV-TK系统辅助伽玛刀杀伤C6胶质瘤效果。方法:在建立Wister大鼠颅内C6胶质瘤模型的基础上,以pCDNA3.1(+)-MU为载体人工构成不同拷贝数CArG/5HRE+HSV-TK的重组质粒,通过脂质体转染到大鼠颅内胶质瘤组织中,并按100mg/kg.d腹腔注射丙氧鸟苷(GCV),在转染后第3天对实验组大鼠行伽玛刀放射外科治疗,照射后第3天取大鼠肿瘤组织。通过瘤组织的形态学变化(HE染色)、瘤体细胞的凋亡(Tunel法)、HSV-TK蛋白的表达(Western blot、免疫组化)、HSV-TK mRNA的表达(Real-time PCR),观察不同拷贝数CArG/5HRE+HSV-TK系统辅助伽玛刀诱导HSV-TK表达及对C6胶质瘤杀伤效果。结果:1、与空载体伽玛刀放射组和HSV-TK伽玛刀放射组相比,含CArG/HRE双启动子伽玛刀组细胞排列密度较疏,细胞破坏明显增多,其中以9CArG/5HRE启动子组最为明显。2、与空载体伽玛刀放射组和HSV-TK伽玛刀放射组相比,含CArG/HRE组经伽玛刀放射后HSV-TK的mRNA表达量明显增加(P<0.05),且9CArG/5HRE启动子组明显高于4CArG/5HRE和12CArG/5HRE启动子组(P<0.05),4CArG/5HRE和12CArG/5HRE启动子组mRNA表达并无明显差异。3、与空载体伽玛刀放射组和HSV-TK伽玛刀放射组相比,含CArG/HRE组经伽玛刀放射后HSV-TK蛋白表达量明显增加(P<0.05),且9CArG/5HRE启动子组均明显高于4CArG/5HRE和12CArG/5HRE启动子组(P<0.05),4CArG/5HRE和12CArG/5HRE启动子组蛋白表达并无明显差异。4、与空载体伽玛刀放射组和HSV-TK伽玛刀放射组相比,含CArG/HRE组经伽玛刀放射后肿瘤细胞凋亡明显增加(P<0.05),且9CArG/5HRE启动子组均明显高于4CArG/5HRE和12CArG/5HRE启动子组(P<0.05),4CArG/5HRE和12CArG/5HRE启动子组细胞凋亡率并无明显差异。结论:在SRS治疗条件下,CArG/HRE双启动子能明显促进目的基因HSV-TK的表达,增加对C6胶质瘤细胞的杀伤,其中,9CArG/5HRE双启动子的作用最明显。
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