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目的:为了探索绿原酸在脂肪组织中抵抗炎症、改善肥胖的分子机制,我们以小鼠3T3-L1前脂肪细胞为体外细胞模型研究绿原酸对其分化及脂肪代谢的影响,为绿原酸的合理利用及膳食结构的改善提供有意义的参考数据。方法:培养小鼠3T3-L1前脂肪细胞,用CCK-8法检测不同浓度绿原酸对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增值的影响。采用经典鸡尾酒法诱导小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化,分别设置空白对照组(Control group,CG)、阳性对照罗格列酮组(Rosiglitazone group,RG)、阴性对照GW9662组(GW9662 group,GG)和绿原酸组(Chlorogenic acid group,CGA),倒置显微镜拍照及油红O染色观察小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化的过程中细胞形态变化及脂滴形成情况;组织细胞甘油三酯酶法测定各组分化后的细胞内甘油三酯积累量;实时荧光定量PCR技术检测小鼠3T3-L1前脂肪细胞脂肪代谢相关基因的m RNA表达及分化过程中相关重要因子过氧化物酶体增殖剂激活受体γ2(peroxisome proliferators-activated receptorsγ2,PPARγ2)m RNA的表达;蛋白质印记法和激光共聚焦定位检测前脂肪细胞分化过程中PPARγ2蛋白表达及定位。结果:当CGA浓度≤20μM时,经过CGA作用后,在48h内,小鼠3T3-L1前脂肪细胞的增殖正常,细胞存活率均在100%左右,和空白对照组(CG)比较无显著性差异(p>0.05)。随着分化的进行,观察到CGA组被油红O染色的区域大于CG组和GW9662组(GG),但明显小于罗格列酮组(RG)染色区域。研究各组前脂肪细胞甘油三酯(triacylglyceride,TAG)积累结果表明,CGA组TAG积累量低于CG组和RG组,与CG组比较无显著性差异(P>0.05),但与RG组比较差异显著(P<0.05)。与CG组比较,CGA干预后的小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化过程中分化重要的关键基因PPARγ2 m RNA和蛋白质表达的水平均显著上调、固醇调节元件结合蛋白1(Sterol regulatory element-binding protein 1,SREBP-1)m RNA的表达也上调,前脂肪细胞因子-1(preadipocyte factor 1,Pref-1)m RNA的表达下调,在细胞分化中期CAAT增强子结合蛋白α(CCAAT enhancer binding proteinα,C/EBPα)m RNA的表达略有上调,在细胞分化中后期CAAT增强子结合蛋白β(CCAAT enhancer binding proteinβ,C/EBPβ)m RNA的表达上调,而CGA干预后的小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化过程中分化相关基因类视黄醇X受体α(Retinoid X receptorα,RXRα)m RNA的表达无显著变化。实时荧光定量PCR检测各组细胞脂肪代谢相关基因m RNA结果表明,CGA干预后的小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化的整个过程中脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase,Fas)m RNA、脂肪分化相关蛋白(adipose differentiation-related protein,Adrp)m RNA的表达上调,在细胞分化前期激素敏感脂肪酶(Hormone sensitive lipase,HSL)m RNA的表达上调,在细胞分化后期围脂滴蛋白(perilipin,Plin)m RNA的表达略有上调,而与脂肪合成相关基因二脂酰甘油酰基转移酶1(diacylgycerol acyltransferase-1,DGAT-1)m RNA的表达无显著变化,但其对DGAT-1 m RNA表达的作用与罗格列酮比较有明显差异,罗格列酮能显著上调DGAT-1 m RNA的表达。CGA干预后的小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化后细胞内TAG无过量积累。结论:绿原酸可以促进小鼠3T3-L1前脂肪细胞的分化,其机制是绿原酸能够上调分化相关基因PPARγ2 m RNA和蛋白质、C/EBPα、C/EBPβm RNA的表达且下调Pref-1 m RNA的表达。与罗格列酮的差异在于,虽然两者都能提高PPARγ2的表达,但被CGA干预的前脂肪细胞分化后得到的成熟脂肪细胞中TAG的积累量却明显少于RG组,其机制是其可以上调脂肪分解相关基因HSL、Adrp、Plin m RNA的表达,但并不上调与脂肪合成相关基因DGAT-1 m RNA的表达。研究结果表明绿原酸影响小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化的机制与罗格列酮不尽相同。