人类完整的免疫功能体系是逐步发育成熟的，从胚胎期到出生后的数年内随年龄增长免疫系统逐渐发育至成人水平，新生儿免疫系统的不成熟在很大程度上是“无经验”，即未建立免疫记忆反应之故。益生菌刺激和增强成年人免疫系统的研究已经有比较深入的认识，但在益生菌作用于新生儿免疫系统的研究尚无全面、深入的报道，本实验旨在通过研究益生菌对新生SD大鼠免疫系统的影响，探讨益生菌应用于新生儿的可行性。 目的:旨在通过检测干酪乳酸杆菌对新生SD大鼠粪便IgA、血浆IL-2、IFN-γ水平以及小肠绒毛形态学的影响，探讨益生菌增强新生动物免疫系统功能的可能性。 材料与方法: 1．动物：一周龄清洁级SD大鼠80只，雌雄不限，体重18～24g，购自中山大学实验动物中心，饲养于该中心无特定病原体(SPF)环境中。 2．分组方法：对每一窝新生SD大鼠进行编号，然后随机抽取每一窝大鼠所有编号个数的一半(若编号个数为偶数)或(编号个数+1)的一半(若编号个数为奇数)，所抽取的编号对应的大鼠作为实验组，每窝余下编号所对应的大鼠作为对照组，分组后分笼饲养。 [1] 对照组：经口给予未含干酪乳酸杆菌的乳饮品，每只1ml/次·天，平时继续正常母鼠喂养。 [2] 实验组：经口予以干酪乳酸杆菌乳饮品，每只1ml/次·天，平时继续正常母鼠喂养。 3．干酪乳酸杆菌：1×10<8> colony forming units(CFU)/ml，由广州益力多乳品有限公司提供。 4．喂养方法：将内有干酪乳酸杆菌乳饮品的注射器前端安装上灌胃针，经一周龄清洁级SD大鼠口腔插入食管入口，然后注射1ml乳饮品进入大鼠胃中，每天注射一次，平时仍继续正常的母鼠喂养。 5．动物的处理方法：实验开始的第1天，第1周第7天，第2周第7天，第3周第7天同一时间点，从两组中各取10只大鼠，共20只。称量每只大鼠的体重，收集每只大鼠新鲜粪便1g，分装于密封小透明塑料袋子中，然后断颈处死后从每只老鼠颈部切断，收集全血3ml，2000转/分钟离心3分钟后提取上清液，存放于-20℃冰箱保存。 6．粪便中IgA的检测：将每一份SD大鼠新鲜粪便1g用萃取液A 1.5ml溶解，再加入萃取液B 50μL，3000转/分钟离心20分钟后收集上清液，采用德国Applichem公司酶联免疫吸附试验检测每份粪便的IgA浓度。 7．血清细胞因子IL-2、IFN-γ吖的检测：运用德国Applichem公司酶联免疫吸附方法检测每份血清的IL-2、 IFN-γ浓度。 8．将已处死的大鼠沿腹正中线剪开腹壁暴露腹腔，从SD大鼠幽门向下4cm处剪取1.0cm×1.0cm×0.2cm长的小肠组织，沿肠系膜缘纵行剖开，冷生理盐水冲洗2～3次，采用HE染色技术观察小肠绒毛形态变化。 9．统计学分析：实验数据以X±S表示，所有数据均采用SPSS10.0软件分析，两组的死亡率比较采用x<2>检验，其余均采用两样本t检验，P<0.05为显著性差异。 结果： 1．SD大鼠存活状况：两组大鼠的3周内死亡率无统计学差异(P>0.05)。 2．实验组与对照组两组SD大鼠不同周数的体重变化：在整个实验的3周中，实验组与对照组均随着时间的推移体重有增长的趋势，在同一时间点两组平均体重相比没有显著性差异(P>0.05)。 3．实验组与对照组不同周数时的粪便IgA浓度变化：两组粪便IgA水平均呈曲线性上升，实验组在第 3 周时远超过同一时间点的对照组粪便IgA水平(P<0.05)。 4．实验组与对照组不同周数时的血清IFN-γ浓度变化：两组INF-γ水平在实验开始的第0周无显著性差异(P>0.05)，但在第1周、第2周以及第3周出现有显著性差异(P<0.05)，其中第一周时对照组高于实验组，但随着实验时间的延长，实验组平均INF-γ水平超过同一时间点对照组平均水平。 5．实验组与对照组不同周数时的血清IL-2浓度变化：第0周两组IL-2水平没有显著性差异，随着实验的进行，第1、2、3周有显著性差异，在第1周时实验组IL-2水平低于对照组，但1周后的IL-2水平实验组有逐渐上升的走向，且超过对照组同一时间点的水平。 6．在第1、2、3周同一时间点同一部位小肠HE染色结果肉眼观察实验组与对照组小肠皱襞以及绒毛结构大体相似；低倍显微镜(HE 10×10)下观察到小肠绒毛呈指状的黏膜突起，突向管腔，单层柱状上皮覆盖绒毛表面，夹杂有杯状细胞，在实验第1、2、3周同一时间点肉眼所见实验组小肠绒毛的稠密程度、排列方式以及光滑度相对于对照组大体上没有差别。 结论： 1．新生SD大鼠粪便分泌型IgA随着干酪乳酸杆菌喂服时间增长而显著增加。 2．喂服干酪乳杆菌一段时间后能促进新生SD大鼠细胞因子IFN-γ、IL-2数量增加。 3．干酪乳酸杆菌在正常生理状态下对新生SD大鼠肠道绒毛在形态学上大体上无影响。