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目的:通过测定不同浓度葡萄糖(Glucose Glu)环境下不同浓度的胰高血糖素(Glucagon Gc)对小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞胰岛素(Insulin Ins)分泌及环磷酸腺苷(Cyclic adenosine monophosphate c AMP)信号通路的影响来进一步探讨Gc在MIN6细胞Ins分泌的c AMP信号通路中的作用及机制。方法:1.体外培养小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞,细胞生长达到一定密度后传代分组进行实验;2.电穿孔法转染ICUE3(c AMP表达的质粒)及阴性对照质粒PCDNA3.1进入MIN6细胞,在无Glu(0mmol/L)、低Glu(2.8mmol/L)、高Glu(16.7 mmol/L)的Glu环境下,分别用无Gc(0 ng/L)、低Gc(500ng/L)、高Gc(1000ng/L)的Gc浓度,然后添加盐酸异丙肾上腺素(Isoprenaline Hydrochloride ISO)对MIN6细胞进行处理,采用基于荧光生物传感器(Biosenser)的荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer FRET)技术法检测不同处理阶段细胞内c AMP水平;3.在不同的Glu浓度及不同的Gc浓度环境下添加或不添加ISO后收集细胞上清液,酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法检测细胞Ins释放量和细胞内c AMP水平;4.数据整理统计分析。结果:1.FRET技术实时定量检测在不同的Glu浓度及不同的Gc浓度环境下的MIN6活细胞内c AMP含量的结果:无Glu时:ISO组CFP/YFP比值较无Gc组增高(P<0.05);低Glu时:ISO组CFP/YFP比值较无Gc组、低Gc组和高Gc组增高(P<0.05),高Gc组较无Gc组增高(P<0.05);高Glu时:ISO组CFP/YFP比值较无Gc组、低Gc组和高Gc组增高(P<0.05),高Gc组较无Gc组增高(P<0.05);低Gc组较无Gc组增高(P<0.05);不同浓度Gc在不同浓度Glu条件下对c AMP生成影响的比较的结果:无Glu时:高Gc加ISO组比高Gc组和低Gc组高(P<0.05),低Gc加ISO组比高Gc组和低Gc组高(P<0.05);低Glu时:高Gc加ISO组比高Gc组和低Gc组高(P<0.05);低Gc加ISO组比高Gc组和低Gc组高(P<0.05);高Gc组比低Gc组高(P<0.05),高Glu时:高Gc加ISO组比;低Gc加ISO组、高Gc组和低Gc组(P<0.05);低Gc加ISO组比高Gc组和低Gc组高(P<0.05)。2.ELISA法检测不同处理组MIN6细胞内c AMP水平结果:在同一Glu环境和同一Gc浓度处理因素下ISO组c AMP水平均高于无ISO组(P<0.05),高Gc组c AMP水平均高于低Gc组和无Gc组(P<0.05),低Gc组c AMP水平均高于无Gc组(P<0.05)。3.ELISA法检测不同处理组MIN6细胞Ins分泌量的结果:在同一Glu环境和同一Gc浓度处理因素下ISO组Ins分泌量均高于无ISO组(P<0.05),高Gc组Ins分泌量均高于低Gc组和无Gc组(P<0.05),低Gc组Ins分泌量均高于无Gc组(P<0.05)。4.MIN6细胞内c AMP含量与Ins分泌量的相关性分析的结果:相关系数r=0.901(R~2=0.813 P<0.05),MIN6细胞内c AMP含量与Ins分泌量之间具有正相关关系。结论:1.Gc以浓度梯度的形式增加小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞内c AMP浓度的同时来促进Ins分泌;2.在加入ISO刺激后这种作用越发明显,说明Gc通过c AMP信号通路促进Ins分泌;3.Gc通过c AMP信号通路促进Ins分泌的作用具有一定的Glu依赖性。