溶组织内阿米巴凝集素中间亚单位片段的表达及应用研究

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目的:重组表达溶组织内阿米巴Gal/GalNAe可抑制性凝集素中间亚单位及其片段,并探讨其血清学诊断价值和疫苗应用价值。 方法与结果:用RT-PCR.的方法从溶组织内阿米巴HM-1:IMSS株滋养体总RNA中扩增除信号区的全长Gal/GalNAe可抑制性凝集素中间亚单位(aa14到1088)、N-末端(aa14到382)、M段(aa294到753)和C-末端(aa603到1088)编码基因,分别插入原核表达载体pET-19b,以大肠杆菌BL21(DE3)pLysS进行表达。 所获得的重组蛋白,用ELISA法检测它们与阿米巴病患者血清的反应性。其中有症状阿米巴肝脓肿或阿米巴结肠炎患者50名、无症状包囊携带者9名、其他原虫病患者38名、健康人20名。重组全长Igl的敏感性为98%,特异性为98%。N-末端、M段、C-末端的敏感性分别为40%、93%、98%;特异性均为98%。将敏感性与特异性均高的C-末端重组蛋白及溶组织内阿米巴粗抗原作为抗原,用ELISA检测上海、安徽、河南三地215名HIV感染者中溶组织内阿米巴血清阳性率为12.09%,191名未感染HIV的胃肠疾病患者的阳性率为3.14%,差别有统计学意义(P=0.001),三地HIV感染者抗溶组织内阿米巴抗体阳性率高于未感染人群。 另外用所得全长Igl重组蛋白免疫中华仓鼠,末次免疫7天后在仓鼠肝内注入溶组织内阿米巴SAW755CR株滋养体,肝内注射7天后,观察免疫效果。Igl免疫的仓鼠中有93%没有出现肝脓肿,对照组有17%的仓鼠没有出现肝脓肿。Igl免疫组仓鼠产生的肝脓肿明显小于对照组(P<0.001),重组Igl能抑制仓鼠肝脓肿的生长。用N-末端、M段、C-末端免疫仓鼠,N-末端和M段重组蛋白免疫的仓鼠都出现肝脓肿,而C-末端免疫的仓鼠没有肝脓肿产生。为了进一步确定保护性表位的位置,又克隆了表达第603到第873个氨基酸蛋白片段的质粒,并表达其重组蛋白C-01,免疫仓鼠后结果显示免疫组有33%仓鼠没有产生脓肿,免疫组产生的脓肿明显小于对照组,C-01能够抑制仓鼠肝脓肿的生长。 结论:溶组织内阿米巴Gal/GalNAc可抑制性凝集素中间亚单位能被有症状阿米巴病患者血清识别,也能被无症状包囊携带者血清识别,其中C-末端重组蛋白在血清学诊断中有高特异性与高敏感性,可作为阿米巴病血清学诊断的抗原;我国某些地区艾滋病感染者中抗溶组织内阿米巴抗体阳性率高于HIV人群;重组Igl对仓鼠肝脓肿的形成有抑制性作用,能够作为预防阿米巴病的候选疫苗分子,其保护性表位可能位于第603到873个氨基酸之间。
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