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聚合酶链式反应(PCR)是分子生物学领域最重要的研究工具之一。在PCR技术中,DNA聚合酶起着关键性作用。PCR反应扩增DNA是在高温条件下进行的,因此需要一种热稳定的酶。Taq DNA聚合酶(Taq酶)是从嗜热杆菌(Thrmus aquaticus)中分离纯化得到的热稳定性DNA聚合酶,是PCR反应中最常用的一种DNA聚合酶。Taq酶的克隆、表达和纯化已经得到广泛研究。但是如何去除酶携带的DNA是纯化Taq酶的一大难点。购买的Taq酶在使用中也常发现酶中有DNA污染,在某些PCR反应中如16S rDNA的扩增中,Taq酶携带的微量DNA也会作为模板扩增从而干扰实验结果的判断。为解决这一问题,本论文采用PEG-Na2SO4法、聚乙烯亚胺(PEI)沉淀法、镍-NTA珠纯化和Salecan-Na2SO4法去除外源DNA。Salecan(索拉胶)是由土壤农杆菌(Agrobacterium sp. ZX09)分泌的胞外多糖,它是一种新的水溶性β-葡聚糖。实验证实,由Salecan与Na2SO4组成的两相体系中,Taq酶与DNA可完全分布在两个不同的相中,同时一部分杂蛋白也分布在含DNA的相中,因此确定为纯化Taq酶的最优方法。由退火温度、引物浓度或Taq酶在PCR起始时的反应活性等因素引起的PCR反应中非特异性条带和引物二聚体的产生,这一问题在PCR反应中普遍存在。热启动PCR是提高PCR特异性的最重要方法之一。本文中使用制备的Taq酶抗体,低温下抑制酶的活性,PCR反应进入高温阶段时Taq酶的活性被释放,减少非特异性条带和引物二聚体的形成,即热启动。很多实验证明β-葡聚糖具有明显的免疫调节作用,可以作为佐剂和免疫增强剂增加巨噬细胞或自然杀伤细胞的活性。目前已发现Salecan具有稳定餐后血糖、缓解甚至削弱急性肝损伤、降低肝脂、血脂、体脂、体重和胆固醇等生理指标等功能。因此,我们提出假想,Salecan与某些β-葡聚糖一样也具有免疫调节作用等生物学活性,能提高抗体效价,并进行验证。研究证实,Salecan用于Taq酶抗体的制备时,具有类似于免疫佐剂的功效,能增加Taq酶抗体的效价。此发现为Salecan在免疫佐剂领域的应用提供了依据。