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核桃(Juglans regia L.)是营养价值较高的坚果。核桃仁中酚类物质含量较多,具有保护心血管、抗氧化和免疫调节等作用。杀螟硫磷(Fenitrothion,FNT)是一种广泛使用的有机磷农药,对神经系统、免疫系统和生殖系统具有毒性。我们前期研究发现,核桃多酚对有机磷农药FNT诱导的免疫毒性具有缓解作用。然而,核桃多酚提取物中具有免疫保护作用的活性成分尚不清楚。本论文研究了核桃多酚对FNT所致脾淋巴细胞毒性的免疫保护作用,利用硅胶柱层析技术将核桃多酚提取物分离为11个不同组分,测定并比较各组分的免疫保护作用,通过高效液相色谱-电喷雾-离子阱/飞行时间串联质谱仪分析核桃多酚活性成分组成,探究具有免疫保护作用的核桃多酚活性成分。主要研究结果如下:(1)首先比较了不同坚果的总酚含量和免疫保护作用。用福林酚法测定未加工的核桃、杏仁、花生和松子多酚提取物的总酚含量,结果发现核桃多酚提取物的总酚含量较高,且主要集中在核桃仁内种皮中。通过MTT细胞增殖实验测定小鼠脾淋巴细胞的增殖率,研究核桃、杏仁、花生、松子多酚提取物对杀螟硫磷(FNT)所致脾淋巴细胞免疫毒性的影响。结果显示核桃多酚提取物对FNT所致脾淋巴细胞免疫毒性的缓解效果较显著;在核桃不同部位中,核桃仁内种皮多酚提取物可显著缓解免疫毒性作用。(2)为探讨核桃多酚的免疫保护作用,将核桃多酚提取物(WPE)联合FNT分别与T/B淋巴细胞、细胞因子白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)、干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)和颗粒酶 B(Granzyme B)共同培养,用MTT细胞增殖实验和ELISA技术测定实验结果。研究表明核桃多酚缓解FNT对脾淋巴细胞所致的免疫毒性具有显著性,尤其是显著提高T淋巴细胞的增殖以及IL-4、IFN-γ、颗粒酶B等细胞因子的分泌水平。(3)为进一步研究具有免疫保护作用的核桃多酚活性成分,用硅胶柱层析技术,将WPE通过不同浓度的洗脱液分离得到FO-F10的11个组分。用MTT细胞增殖分析技术研究各个组分的免疫保护作用,结果显示以甲醇:三氯甲烷为2:8作为洗脱剂时,洗脱得到的组分F8免疫保护作用在1 1个组分中最佳。(4)用高效液相色谱耦合电喷雾串联质谱对核桃多酚和活性组分F8组分进行成分分析。结果显示核桃多酚中含有鞣花单宁、棓单宁、酚酸和类黄酮等4大类化合物,共19种酚类化合物。其中13种为鞣花单宁类(占82.80%);3种属于棓单宁(占9.75%);1种酚酸(鞣花酸)(占3.74%);2种属于类黄酮(占1.65%)。核桃多酚中单聚体鞣花酸和鞣花单宁类占比达86.54%。活性组分F8含有鞣花酸、鞣花酸戊糖苷异构体、鞣花酸己糖苷异构体和槲皮素等4种酚类化合物。其中鞣花单宁类占21.93%;酚酸类占62.05%;类黄酮类占16.02%。F8组分中鞣花酸和鞣花单宁总含量为83.98%,与槲皮素含量比例为5.24:1。以上结果表明核桃多酚通过恢复脾淋巴细胞增殖率、T淋巴细胞数量和细胞因子IL-4、IFN-γ、颗粒酶B分泌水平,显著地降低FNT诱导的脾淋巴细胞毒性。核桃多酚活性组分主要为鞣花酸及鞣花单宁,它们在核桃多酚的免疫保护作用中发挥重要的作用。