【摘 要】
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研究背景:原发性肝细胞癌恶性程度高,5年生存率仅约14%,且治疗手段有限。近年来,免疫检查点抑制剂在抗肝癌治疗中效果良好,但应答率普遍较低。肿瘤微环境中PD-L1高表达可促进肿瘤发生免疫逃逸。因此,阻断肿瘤微环境中PD-L1的升高继而阻止免疫逃逸,有望提高免疫治疗效果。我们开展了利用溴结构域蛋抑制剂阻断继发诱导的PD-L1表达,将PD-1单抗联合BRD4蛋白抑制剂和PD-L1小分子抑制剂联合治疗肝
【基金项目】
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国家自然科学基金（82073898）；
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研究背景:原发性肝细胞癌恶性程度高,5年生存率仅约14%,且治疗手段有限。近年来,免疫检查点抑制剂在抗肝癌治疗中效果良好,但应答率普遍较低。肿瘤微环境中PD-L1高表达可促进肿瘤发生免疫逃逸。因此,阻断肿瘤微环境中PD-L1的升高继而阻止免疫逃逸,有望提高免疫治疗效果。我们开展了利用溴结构域蛋抑制剂阻断继发诱导的PD-L1表达,将PD-1单抗联合BRD4蛋白抑制剂和PD-L1小分子抑制剂联合治疗肝癌研究,期望进一步提高肝癌的治疗效果。研究方法:1.建立BALB/c小鼠肝癌模型,免疫组化方法检测PD-1单抗干预治疗后,小鼠瘤组织内PD-L1的表达变化;2.体外慢病毒转染技术验证PD-L1的表达对肿瘤的影响;并用WB及qPCR技术检测BRD4抑制剂对PD-L1表达的影响;3.利用细胞转染、染色质免疫共沉淀技术（ChIP）、双荧光素酶报告基因技术等方法探究CPI-203调控PD-L1表达的机制;4.体内验证CPI-203联合PD-1单抗治疗肝癌的效果,并监测不良反应;5.评价靶向PD-L1的小分子抑制NP19单药以及与PD-1单抗联合抗肝癌治疗效果。研究结果:1.在BALB/c小鼠肝癌模型中,PD-1单抗治疗诱导肿瘤微环境中PD-L1蛋白表达上调,继发免疫逃逸,影响PD-1单抗的抗肿瘤效果;2.IFN-γ刺激HepG2细胞后上调PD-L1的表达,但BRD4抑制剂CPI-203干预后,PD-L1的高表达被抑制;同时肝癌细胞在高表达PD-L1时恶性迁移特性增强。3.细胞转染实验显示,siRNA敲低肝癌细胞BRD4可抑制PD-L1表达,而过表达BRD4后促进PD-L1的表达;ChIP实验结果表明CPI-203抑制BRD4与PD-L1启动子区域的结合;双荧光素酶报告基因实验结果提示CPI-203抑制PD-L1基因启动子的转录活性;4.CPI-203联合PD-1单抗组给药后,小鼠肿瘤体积明显缩小、起效时间较早;相关指标的检测结果显示联合治疗未对肺、肠、肝肾及骨髓功能产生影响;5.PD-L1小分子抑制剂NP19对肝癌具有免疫治疗作用;将NP19与PD-1单抗联合具有协同抗肝癌效果,且未诱导免疫相关性不良事件的发生。研究结论:BRD4抑制剂CPI-203协同PD-1单抗发挥抗肝癌效果;CPI-203通过抑制肿瘤微环境中PD-L1的升高,提高PD-1单抗在肝癌免疫治疗中的应答率,且联合用药的方案对小鼠的毒副作用较低、耐受性好;PD-L1的小分子免疫调节剂NP19通过直接作用于PD-L1发挥抗肝癌效果,与PD-1单抗联合后能更好的发挥抗肝癌免疫治疗的效果,有望与PD-1单抗联合作为潜在免疫治疗手段,降低临床上免疫检查点抑制剂耐药的发生率。
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