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磷脂酶是一种与磷脂代谢相关的酶,能催化甘油磷脂的水解反应,水解产物是各种磷脂酸(胆碱、丝氨酸)和氨基醇(乙醇胺)。根据其水解磷脂位点的不同可以分为磷脂酶A1、A2、 B1、B2、C、D,磷脂酶的商业应用前景广泛。例如PLA1、PLA2、PLC和PLD可以被广泛应用于油脂精练、磷脂改性、食品及农业杀虫剂等方面,PLC可以被应用于抗肿瘤药物,尤其在植物油脱胶等方面有广阔的应用前景,磷脂酶广泛存在于动物、植物和微生物中。微生物来源的磷脂酶种类较多,易于大规模生产,并成为工业用酶的最主要来源。本课题采用卵黄平板法从甘肃周边不同来源土壤样品中分离得到80株磷脂酶C生产菌株,经复筛得到一株磷脂酶C产量较高且该酶具有热稳定性的菌株JYSY1。并对菌株JCSYl进行了菌落形态观察(菌落大小、颜色、凸起、边缘形状)、革兰氏染色、芽孢染色、生理生化分析、16S rDNA序列同源性分析,初步鉴定菌株JYSY1是蜡样芽孢杆菌(Baclilus cereeas)。该菌株的最适生长温度及培养时间分别为25℃,24h；最佳产酶温度及培养时间分别为30℃,30h；最适生长初始pH值为7.0；最佳产酶初始pH值为7.0。本文采用(NH4)2SO4盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换、Sephadex G-100凝胶层析从菌株JYSY1的发酵上清液中分离纯化得到了磷脂酶C。并通过SDS-PAGE电泳法对照标准蛋白Marker测得其分子量约为48kDa,该酶的最适作用温度为50℃,最适作用的pH为8.0,当磷脂酶C在pH为8.0左右时酶活力比较稳定。Co2+和Ca2+的终浓度为0.1mmol/L时对酶促反应有促进作用,酶活力分别提高到111.59%,110.11%。Zn2+Mg2+对酶有抑制作用,当Zn2+、Mg2+终浓度达到1mmol／L时酶活力分别为58.13%,62.65%。因此Zn2+、Mg2+终浓度越大,抑制作用越明显。SDS、EDTA、EGTA均对磷脂酶C有抑制作用,PMSF对酶活力影响不大。该酶热稳定性较好,65℃保温30min后酶活力能维持在55%以上,温度超过70℃,酶活力大部分丧失,可以推断该酶是一种比较稳定的磷脂酶C,经底物特异性分析确定纯化的酶是一金属磷脂酶C。