[目的]　　 本文为同时含有陈皮和甘草两味中药材的园丁糖提供了一套全面、系统的检测方法。为含此两味中药材的方剂中含有的橙皮苷和甘草酸的定量提供了一条有效、方便的途径。　　 园丁糖是由陈皮、甘草等多味中药组成,用于咽喉肿痛、咳嗽痰盛、咽炎等症。本文针对园丁糖工艺不完善,缺乏安全、有效、可靠的质量标准体系的问题,结合中药品种的产业化、现代化和国际化进程的要求,对该复方制剂中的提取工艺和质量控制进行了系统的实验研究。　　 中药血清、血浆药理学是一种适合中药特点的进行体外实验的一种新的药理方法学,它排除了传统中药体外实验中中药本身的理化性质对实验结果的干扰,又能反映药物在体内的生物转化过程及其作用结果。本研究在已有的研究基础上,利用中药血清、血浆药理学实验方法对园丁糖预防及治疗鼻咽癌的作用进行深入的研究,并通过HPLC、MTT、RT-PCR等技术进一步探讨园丁糖预防及治疗鼻咽癌的作用机理。　　 [方法]　　 1.HPLC法同时测定园丁糖中甘草酸和橙皮苷的含量　　 本文采用色谱柱为Phenomenex C18柱(150mm x4.60mm,5μm),乙腈-3％醋酸为流动相进行梯度洗脱,流速为1mL/min,检测波长为260nm,柱温为25℃,同时检测橙皮苷和甘草酸的含量。　　 2.园丁糖水提取工艺系统研究　　 在提取工艺中,根据处方中有效成分和理化性质,通过正交实验设计,以复方制剂中橙皮苷和甘草酸的含量作为指标,对水提取工艺的条件进行了优选。　　 3.园丁糖含药血清、血浆抑制鼻咽癌细胞CNE-1增殖的研究　　 园丁糖提取液和生理盐水灌胃新西兰大白兔,每天一次,灌胃10d,于最后一次灌胃后,30min内分离颈总动脉取全血,园丁糖提取液灌胃组和生理盐水灌胃组分别处理为不灭活含药血清组、不灭活含药血浆组、灭活含药血清组、灭活含药血浆组等,用HPLC法鉴定不灭活和灭活含药血清、血浆;通过MTT实验检测不灭活和灭活含药血清、血浆对鼻咽癌CNE-1细胞的抑制率。　　 4.园丁糖20%浓度灭活含药血清对鼻咽癌细胞PAR-2表达影响的实验研究　　 根据第三部分结果,采用20%浓度的含药灭活血清处理鼻咽癌CNE-1细胞,于6h、12h、24h、48h后收集细胞,提取mRNA,RT-PCR检测细胞中蛋白酶激活受体-2(PAR-2)表达变化。　　 [结果]　　 1.HPLC法同时测定园丁糖中甘草酸和橙皮苷的含量　　 橙皮苷在50.9～407.2μg/mL的范围内与峰面积呈良好的线性关系(R2=0.9995),平均回收率为97.85%,RSD为2.28%;甘草酸在50.8～404.0μg/mL的范围内与峰面积呈良好的线性关系(R2=0.9992),平均回收率为98.12%,RSD为1.99%。　　 2.园丁糖提取工艺系统研究　　 结合方剂中药物特性及制剂的一般要求,最终确定了提取工艺。最佳工艺为:超声1小时,加14倍水,60℃煮提2小时。　　 3.园丁糖含药血清、血浆抑制鼻咽癌细胞CNE-1增殖的研究　　 用HPLC法鉴定含药血清、血浆的制备,结果表明,含药血清、血浆中不同程度的含有微量的橙皮苷和甘草酸,证明含药血清、血浆的制作成功。应用MTT实验观察不同浓度园丁糖未灭活含药血清、未灭活含药血浆、灭活含药血清、灭活含药血浆对鼻咽癌生长的抑制作用。结果表明在48h范围内,随着血清、血浆浓度的增加,园丁糖未灭活含药血清、未灭活含药血浆、灭活含药血清、灭活含药血浆相对于对照组对鼻咽癌生长的抑制率呈增长的趋势,呈现良好的量-效、时-效关系,且在20%浓度的园丁糖未灭活含药血清、未灭活含药血浆、灭活含药血清、灭活含药血浆与空白组比较有显著差异(P＜0.05)。　　 4.园丁糖20%浓度灭活含药血清对鼻咽癌细胞PAR-2表达影响的实验研究　　 园丁糖20%浓度灭活含药血清处理CNE-1细胞后PAR-2 mRNA表达量与对照组比较显著降低。　　 [结论]　　 HPLC法同时测定园丁糖中甘草酸和橙皮苷的含量方法简便、准确、重现性好、可更好的控制含陈皮和甘草的中成药的质量,为后续试验提供了可靠保证;通过筛选的最佳工艺,达到橙皮苷和甘草酸的提取率稳定,该方法节约能源、降低成本、适合工业化大生产;园丁糖含药血清、血浆能抑制鼻咽癌CNE-1细胞增殖、促进其调亡,可能机制为抑制PAR-2的表达,此为园丁糖在鼻咽癌防治中的应用提供了理论依据。