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锌和铝均为自然界普遍存在重要的金属元素,对生物机体具有广泛的影响。关于其对神经系统功能尤其是高级功能的影响一直被关注,但它们究竟是如何影响神经系统的主要功能单位-神经细胞的尚未完全明确。本文主要采用培养的新生小鼠脑皮层细胞和神经样细胞PC12细胞试图通过体外实验观测不同浓度的锌和铝单独或同时使用对神经细胞状况的影响。主要研究内容及结果如下:
⑴锌、铝处理对急性分离的新生小鼠脑皮层细胞影响:不同浓度梯度的锌(25、50、75、100μmol/L)和不同浓度梯度的铝(250、500、750、1000、1250μmol/L)处理急性分离的小鼠脑皮层细胞1h。处理结束后,用台盼兰检测细胞的存活率,用单细胞凝胶电泳实验检测细胞DNA损伤情况。结果:各锌处理组细胞存活率均大于90%,25、50和75μmol/L的锌对细胞影响不大,100μmol/L的锌使细胞DNA受损,电泳出现拖尾;各铝处理组细胞存活率均大于90%,1000和1250μmol/L的铝致细胞DNA受损,电泳出现拖尾。结论:较高浓度锌、铝处理均可使急性分离的新生小鼠脑皮层细胞DNA受损。
⑵铝处理对PC12细胞状态的影响:不同浓度梯度的铝(250、500、750、1000、1250μmol/L)处理PC12细胞24h。处理结束后,用台盼兰检测细胞的存活率,用单细胞凝胶电泳实验检测细胞DNA损伤情况,用比色法检测细胞上清液中MDA、SOD的变化状况。结果:各处理组细胞存活率均大于90%,1000、1250μmol/L组铝引发细胞聚集,不同程度的脱落,DNA损伤,电泳出现拖尾,且与对照组相比,MDA显著升高,SOD呈降低的趋势。结论:较高浓度铝的神经毒可能与其诱导PC12细胞DNA损伤和铝的氧化应激作用有关。
⑶锌处理对PC12细胞状态的影响:不同浓度梯度的锌(25、50、75、100μmol/L)处理PC12细胞24h。处理结束后,用台盼兰检测细胞的存活率,用单细胞凝胶电泳实验检测细胞DNA损伤情况,用比色法检测细胞上清液中MDA、SOD的变化状况。结果:各处理组,除100μmol/L组外,细胞存活率均大于90%,75μmol/L的锌使部分PC12细胞皱缩,突起消失,DNA损伤,电泳出现拖尾,MDA和SOD与空白组比较差异显著,100μmol/L组PC12细胞死亡率多达90%,细胞突起完全消失。结论:致DNA受损和氧化应激可能是高浓度的锌发生神经毒性作用的机制。
⑷锌对培养的染铝PC12细胞状态的影响:检测锌铝同时作用和先锌后铝两种状况下对PC12细胞状态的影响。结果:铝锌同时作用24、72h,锌不能拮抗铝的毒性,随着时间的延长,还会加重对细胞的损伤。而先锌后铝处理,能在一定程度减弱铝的毒性,保护细胞。结论:锌的预处理能够在一定程度减弱铝对细胞的毒性,可能在于预先补锌,有利于锌进入胞内,能够诱导诱导一些抗氧化蛋白的表达。