镉和壬基酚对鲫鱼肝细胞的毒理作用及联合作用的评价

被引量 : 3次 | 上传用户:haierv70
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
镉和壬基酚是常见的两种环境污染物,近年来,随着工业生产中镉的使用量增加,及化学添加剂壬基酚聚氧乙烯醚(壬基酚前体物质)的广泛使用,环境中镉、壬基酚含量呈上升趋势。由于镉、壬基酚常与许多天然和人工污染同时进入环境,而引起复合污染,镉、壬基酚联合暴露给生物健康带来的一系列危害引起了广泛关注。肝脏是急性镉中毒的靶器官和蓄积部位,壬基酚可诱导鱼类肝脏卵黄蛋白原的合成,参与雌性性成熟过程,国内外研究者从环境污染、职业性暴露及动物实验多方面对镉、壬基酚所致肝毒性机理进行了研究,但两者联合毒性的研究则相对较少,本研究以鲫鱼原代培养肝细胞为模型,较系统的探讨了镉、壬基酚及其联合对鲫鱼肝脏的毒性损伤效应及作用机理,为进一步认识镉和壬基酚及其联合毒性作用提供理论依据。第一部分:无菌分离鲫鱼肝脏组织采用酶消化法分离肝细胞,并使用含有新生牛血清的M199培养基对其进行体外培养,通过形态学及台盼蓝染色法的鉴定,分离的肝细胞完整,呈圆形,存活率90%以上,说明该方法是较为理想的肝细胞培养法。在此基础上增加了:葡萄糖洗必泰对组织块的消毒,Percoll分离液对细胞的纯化,胎牛、新生牛血清对细胞培养的影响等3个部分的内容,发现使用葡萄糖洗必泰和新生牛血清对原代肝细胞培养有利。第二部分:镉的肝细胞毒性研究了镉诱发鲫鱼肝细胞相关的胞内游离钙离子变化,以及Ca2+-ATP酶及金属硫蛋白表达量的变化。试验分为对照组、5、10、15、20μmol/LCdCl2 5个组。Ca2+用Fura-2/AM方法检测,试验后24h用荧光倒置显微镜观察细胞内游离钙离子变化;分光光度法检测Ca2+-ATP酶;石墨炉—原子分光光度法检测了细胞内镉离子浓度;免疫酶联法(ELISA)检测了金属硫蛋白(MT)含量。结果显示,镉可导致细胞存活率下降,具有一定的毒性。镉离子引起胞内Ca2+荧光强度和Ca2+-ATP酶活性增加(P<0.01)。随镉浓度升高,处理组Ca2+-ATP酶浓度活性分别是对照组的6.73、6.68、7.19、6.18倍;暴露24h后各组细胞内镉离子均有上升,其中5μmol/L组最高,达2.045±0.322μmol/L;各处理组金属硫蛋白(MT)含量增高(P<0.01),且5μmol/L低浓度组MT增幅最大,达17.15%。结果提示,镉诱导下细胞内Ca2+升高,MT表达量上升,且MT可螯合进入细胞内的镉离子,这种螯合可能是降低镉毒理作用的机制之一。第三部分:壬基酚的肝细胞毒性研究了壬基酚诱发鲫鱼肝细胞相关的胞内游离钙离子变化,以及Ca2+-ATP酶及金属硫蛋白表达量的变化。试验分为对照组、10-7、10-6、10-5、10-4、10-3mol/LNP 6个组。Ca2+、Ca2+-ATP酶、MT的检测方法同镉。结果显示,壬基酚可抑制肝细胞增殖,并且高浓度组的细胞与对照组相比增殖能力显著下降,倒置显微镜的细胞形态观察显示,10-3mol/LNP对细胞产生了明显的细胞毒性,细胞形态发生明显改变。随着壬基酚浓度的升高,MT表达量呈现U型变化趋势,10-7、10-5μmol/L引起MT表达量的升高(P<0.05,P<0.01),10-6mol/L组MT表达量显著下降(P<0.01),高浓度组组同对照组无显著性差异。根据细胞存活率及MT表达量差异选择10-6、10-4μmol/L作为受试浓度,进一步检测发现壬基酚离子引起胞内Ca2+荧光强度和Ca2+-ATP酶活性增加(P<0.01)。随壬基酚浓度升高,处理组Ca2+-ATP酶活性分别是对照组的分别增加了6.2、4.6倍。结果提示,壬基酚引发细胞内Ca2+升高,是细胞损伤的机制之一。第四部分:镉和壬基酚的联合作用采用3种联合作用评价方法毒性单位法、相加指数法、混合毒性指数法对结果进行分析,得到的结论一致,镉和壬基酚在受试范围内均呈协同作用,毒性从强至弱分别为20μmol/L Cd+10-4 mol/L NP组、15μmol/L Cd +10-4mol/L NP组、20μmol/L Cd +10-6mol/L NP组、10μmol/LCd +10-4mol/L NP组、15μmol/L Cd +10-6mol/L NP组、5μmol/L Cd +10-4mol/L NP组、10μmol/L Cd +10-6mol/L NP组、5μmol/L Cd +10-6mol/L NP组,、5μmol/L Cd +10-6mol/L NP组的协同作用最强,20μmol/L Cd+10-4 mol/L NP组最弱。单独作用的Cd和10-4mol/LNP没有抑制MT的表达,而联合作用下出现抑制;联合作用时Ca2+-ATP酶活性与镉单独作用时相比出现下降。结论:镉和壬基酚有协同作用,MT和Ca2+-ATP酶可作为协同作用的评价的参考指标。
其他文献
目的研制一种防雾时间长、透明无毒、无刺激性的鼻内窥镜防雾剂。方法采用正交试验制得27种配比不同的无色透明、无刺激性鼻内窥镜防雾剂,pH7~8。采用Storz00鼻内镜及显像系
目前,任务型教学在我国外语教学界备受关注。自国家教育部颁布了新的《英语课程标准》(2003)以来,任务型教学的普及更为迫切。该标准强调通过任务型学习活动发展学生“运用语
<正>【引子】华生,行为主义心理学的创始人。他认为心理学研究必须抛弃"内省法",而应采用自然科学常用的实验法和观察法,心理学研究的对象不是意识而是行为。华生在使心理学
<正>相信大多数人对于维果斯基都不陌生,他的"最近发展区"理论被广泛地运用在教育、教学领域,可谓深得人心。追忆其短暂但是成果丰富的一生,不可否认他是一个魅力四射的天才
为解决曲柄压力机滑块行程调节的问题,以公称力为800 kN的压力机为研究对象,进行了大量仿真分析和样机实验,调查分析了目前生产的行程可调压力机在使用过程中出现的调节不便
机械振动与噪声信号中蕴含着机器设备运行状态的重要信息,可用来进行机器状态监测与故障诊断。但基于振动信号的故障诊断技术在某些场合下存在着局限性,而机械噪声信号同样蕴
油藏开发闭合生产优化是将油藏模拟历史拟合和生产优化两个阶段有机结合,在实时更新油藏地质模型的基础上,对油田开发进行生产优化控制,从而达到降低油田开发不确定性,提高经
聚二甲基硅氧烷(PDMS)由于其廉价、无毒、容易构造、光学透明、气体通透性等优良的化学性质被广泛应用。但是,由于表面强的疏水作用、生物粘附等特性,大大限制了PDMS在微流控
目的:桑叶为桑科植物桑(Morus alba L.)的干燥叶,具有疏散风热,清肺润燥、清肝明目的功能,是常用中药之一。现有的研究表明生物碱和黄酮类物质是桑叶中主要的降血糖活性成分,
编码调制技术是一种将信道编码与调制作为一个整体联合进行设计的差错控制技术,以期同时获得分集增益和编码增益,从而提高通信系统的传输频谱效率和功率谱效率。低密度奇偶校