【摘 要】
：
目的:食管癌处于全球肿瘤病死率第六位,也是福建省高发病率的一类肿瘤,化学药物是食管癌的主要治疗手段之一,但在后期常常遭遇耐药的情况。许多研究表明,细胞自噬（autophagy）机制在肿瘤耐药中起重要作用。本研究拟探讨自噬调节蛋白UNC-51样激酶1（UNC-51 like kinase 1,ULK1）在食管癌中的表达情况,以及转染该基因对食管癌细胞增殖的影响;观察ULK1抑制剂MRT68921及S
论文部分内容阅读
目的:食管癌处于全球肿瘤病死率第六位,也是福建省高发病率的一类肿瘤,化学药物是食管癌的主要治疗手段之一,但在后期常常遭遇耐药的情况。许多研究表明,细胞自噬（autophagy）机制在肿瘤耐药中起重要作用。本研究拟探讨自噬调节蛋白UNC-51样激酶1（UNC-51 like kinase 1,ULK1）在食管癌中的表达情况,以及转染该基因对食管癌细胞增殖的影响;观察ULK1抑制剂MRT68921及SBI-0206965对人食管癌细胞增殖的影响;以及抑制剂SBI-0206965与化疗药顺铂联合应用于人食管癌细胞对肿瘤细胞增殖的影响,探讨ULK1抑制剂在食管癌化疗中潜在的临床应用价值。方法:1.通过肿瘤相关基因表达数据库Oncomine分析ULK1基因在食管癌组织中的表达水平。收集10对人食管癌组织和食管正常组织,提取总RNA,通过逆转录-实时定量PCR（RT-q PCR）检测人食管癌组织中自噬相关基因的RNA表达水平。2.（1）在人食管癌细胞系ECA109中过表达/敲减ULK1基因,通过Western Blot检测转染质粒后ULK1和磷酸化ULK1（p-ULK1）的水平;（2）在人食管癌细胞的ULK1过表达/敲低模型上,通过平板克隆形成实验,观察ULK1过表达/敲减对人食管癌细胞单克隆形成能力的影响。3.（1）通过CCK-8法评估ULK1非选择性抑制剂MRT68921和ULK1特异性抑制剂SBI-0206965对人食管癌细胞系ECA109细胞增殖能力的影响;（2）采用SBI-0206965处理人食管癌细胞,并对细胞进行雷帕霉素处理,收集细胞,提取蛋白,检测自噬相关蛋白LC3、P62和p-ATG14等表达水平;（3）通过细胞毒实验和细胞生长曲线绘制,观察SBI-0206965可否增强顺铂对人食管癌细胞的毒性;（4）通过Western Blot检测细胞增殖蛋白Cyclin D1的水平,初步探讨SBI-0206965增强顺铂对人食管癌细胞毒性的作用机制。结果:1.肿瘤数据库Oncomine分析显示ULK1在食管鳞状细胞癌中高表达,检测结果显示ULK1、ATG14的m RNA在食管癌组织中平均表达水平高于正常人食管组织,而p62的表达低于正常组织,差异具有统计学意义（p<0.01）。2.（1）通过转染实验,成功地在人食管癌细胞中对ULK1蛋白进行有效的过表达和敲减干扰;（2）平板克隆形成实验结果显示,敲减ULK1组和对照组、空白组相比,敲减组的细胞克隆形成能力明显下降。3.（1）ULK1的两种抑制剂均可抑制人食管癌细胞的增殖且呈时间、浓度依赖性;（2）SBI-0206965通过阻碍ULK1复合体的形成,进一步阻碍ATG14的磷酸化,减少p-ATG14的表达水平,从而减少自噬小体的形成,进而抑制细胞自噬;（3）低浓度SBI-0206965与顺铂联用可增强顺铂对人食管癌细胞的毒性;（4）SBI-0206965与顺铂联用,通过减少细胞周期蛋白Cyclin D1的表达水平,增强顺铂对人食管癌细胞的毒性。结论:1.ULK1的m RNA在人食管癌组织中表达上调;2.在人食管癌细胞中敲低ULK1的表达可减弱人食管癌细胞的增殖能力;3.ULK1抑制剂可抑制人食管癌细胞增殖且呈时间、浓度依赖性;4.ULK1抑制剂与化学药物顺铂联用,可通过抑制ULK1激酶活性进一步抑制细胞自噬,从而增强后者对人食管癌细胞的毒性。
其他文献
目的:探讨SCN8A基因突变相关癫痫的临床表型特征与基因突变特点之间的关系,为临床早期明确诊断与精准治疗及遗传咨询提供依据。方法:筛选经全外显子测序发现的8例SCN8A基因突变患儿,采用回顾性分析的方法总结分析其临床表现、家族史、脑电图、颅脑MRI等及基因突变的位点、方式、类型及ACMG分级,并结合国内外文献材料,探讨SCN8A基因突变不同的基因突变方式与表型的相关性以及不同突变类型与表型间的关系
此次实验针对第三代先进汽车用钢成本降低,安全性提高,能耗减少的生产要求,对Fe-2Mn-4Al-0.4C、Fe-10Mn-4Al-0.4C两种不同Mn含量的实验钢设计了不同的轧制和热处理工艺。通过对实验钢进行热轧实验,并对轧制后试样进行不同温度的退火处理,利用Thermo-Calc软件并借助光学显微镜（OM）、X射线衍射技术（XRD）、电子背散射衍射（EBSD）检测技术对显微组织进行观察研究并进行
目的Wnt/β-catenin信号与细胞增殖、分化及组织发育密切相关[1],近年来在神经病理性疼痛研究领域也受到广泛关注。三叉神经痛（Trigeminal neuralgia,TN）是临床上常见的一种神经病理性疼痛（Neuropathic pain,NP）,其发病机制尚未完全阐明。本课题拟通过建立三叉神经根区慢性压迫大鼠模型,分析Wnt/β-catenin信号相关分子在TN模型大鼠TREZ区的表达
目的:研究亚氨基二丙腈（iminodipropionitrile,IDPN）构建的抽动障碍（tic disorders,TD）模型大鼠脑组织中α2A-肾上腺素能受体(alpha2A-adrenergic receptor,α2A-AR)的表达水平,探讨α2A-AR激动剂可乐定对TD模型大鼠脑区α2A-AR的表达影响以及行为学改变,为TD的发病机制研究和临床用药提供实验依据。方法:（1）模型构建与分
目的:研究血清S100β蛋白、hs-CRP在急性脑梗死患者外周血中的水平,了解S100β、hs-CRP对脑梗死患者3个月临床转归的预测价值,以便对急性脑梗死患者进行分层管理,提高医疗资源配置效率。方法:选取2019年10月至2020年5月福建省龙岩市第二医院神经内科住院患者194例,根据是否符合《2018年中国急性缺血性卒中诊治指南》中对于脑梗死的诊断标准,将研究对象分为两组,（1）脑梗死组100
目的探讨不同亚型注意缺陷多动障碍（Attention-Deficit/Hyperactivity Disorder,ADHD）儿童在韦氏儿童智力量表第四版（Wechsler Intelligence Scale for Children-The Fourth Edition,WISC-Ⅳ）中各指数的特点,是否存在差别,并分析其相关影响因素。方法本研究属于回顾性研究。选取2019年6月至2020年1
背景及目的视神经脊髓炎谱系疾病（Neuromyelitis optica spectrum disorder,NMOSD）是一种主要累及视神经和脊髓、以高复发率和高致残性为特点的中枢炎性脱髓鞘性疾病。NMOSD患者自然病史通常为多相病程,且随着发病次数的增加,残疾系数则越高,而早期诊断,尽早干预可提高NMOSD患者生活质量。NMOSD的诊断有赖于患者的临床表现、实验室检查、影像学检查等,其中针对水
随着电子信息技术的不断发展,不同平台的电子信息系统功能变得越来越强大,同时系统所遭受的电磁兼容（Electromagnetic Compatibility,EMC）和电磁干扰（Electromagnetic Interference,EMI）越来越严重,这引起了工业界和学术界的广泛关注。由于存在各种天线、电缆、传输线、电路和外部电磁辐射（EMI）等,大多数电子系统的电磁环境变得越来越复杂。电磁耦合
研究目的:阿尔茨海默病的两大病理特征是由β-淀粉样蛋白（Amyloid-β,Aβ）聚集产生的淀粉样斑块（Senile plaque,SP）和由微管相关蛋白Tau过度磷酸化并聚集形成的神经原纤维缠结（Neurofibrillary tangle,NFT）。Aβ的异常聚集是AD的早期病理改变之一,其聚集过程生成的不同大小和形态的聚集体可导致神经系统毒性,其中以寡聚体最为显著。DAPK1在AD患者的脑组
目的:肠道菌群是指居住在胃肠道中的细菌、真菌、病毒等微生物共同组成的微生物组,它们在正常生理情况下互相制约、互相依存,在体内形成一种动态平衡。近来,肠道微生物组在健康和疾病中的作用越来越引起人们的关注,许多观察和体外研究表明它可能在乳腺癌的发生和发展中起作用。本文通过比较良恶性肿瘤患者的肠道菌群,对肠道菌群与乳腺癌易感性进行相关性分析。方法:纳入2019年1月至2020年12月就诊我院的102名患