在T淋巴细胞中生长激素基因转录调控及其功能的研究

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hengtonggss
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生长激素(growth hormone,GH)除对机体促进生长发育外,还有重要的调节免疫系统功能的作用。近年来有证据表明淋巴细胞表面有GH的受体存在,并且淋巴细胞也能分泌GH,称为淋巴细胞免疫反应性GH(immunoreactive growth hormone,irGH)。所以神经内分泌系统和免疫系统之间可通过GH将信息相互传递,从而维持机体的生理平衡和稳定。目前,GH与淋巴细胞功能之间的关系已成为神经内分泌免疫网络研究领域的热点之一,前一阶段人们的研究主要集中在细胞水平的研究,且各实验室研究的结果也不一致。为了对GH与淋巴细胞之间的关系有一个深入的认识,本研究从分子水平探讨淋巴细胞irGH的分泌调控机制以及内外源性GH对淋巴细胞表达IL-2R,分泌IL-2、IFN-γ的影响。 本研究首先以正常人外周血淋巴细胞DNA为模板,根据人垂体生长激素基因的核苷酸序列设计合成一对寡核苷酸引物,通过PCR扩增出人淋巴细胞免疫反应生长激素(irGH)基因5’近端的调控序列,然后将其与质粒PGEM7Zf(+)连接,经转化、蓝白斑筛选、酶切鉴定,获得PGEM7Zf(+)—irGH DNA(-484—+2bp)重组质粒,序列分析结果证实与垂体细胞GH基因的5’近端调控序列的核苷酸顺序完全相同。 将已克隆的GH基因调控序列片段(-484—+2bp)插入PGL2-Basic-luc中,构建成PGL2-GH-luc荧光素酶报告基因质粒,并转染入Jurkat细胞,研究GH、GHRH、TRH、IGF-1和SS对淋巴细胞中irGH分泌的调控作用。结果表明:GH、GHRH对irGH的表达有明显的抑制作用(约50%),且不依赖于剂量,高剂量的SS和TRH(100nM)对irGH的表达也有抑制作用(85%左右),表明淋巴细胞irGH的分泌调节与垂体GH的不完全相同。 为了研究淋巴细胞分泌的细胞因子对irGH的调节作用,我们将PGL2-GH-luc荧光素酶报告基因质粒转染入Jurkat细胞后,观察IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-β和IFN-γ对淋巴细胞irGH分泌的调控作用。结果表明:生理剂量的IL-1β、TNF-β和IFN-γ对irGH的表达有明显的抑制作用,高剂量的IL-1β、IL-2和IL-6(100u-1000u)对irGH的表达也有明显的抑制作用,而高剂量TNF-β则没有明显作用。激素和细胞因子对irGH的表达主要是起抑制作
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