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背景:脑血管病(cerebrovascular disease,CVD)为临床神经内科多见的一类严重疾病,其发病人数与致残人数均居高不下。其中,缺血性脑血管病(ischemic cerebrovascular disease,ICVD)约占所有脑血管病的80%,目前已严重威胁我国高龄人群生命健康及生存质量,是以寻求更有效的ICVD治疗手段和药物迫在眉睫。自血管新生(Angiogenesis)于肿瘤治疗中被应用后,该方法得到医学诸多领域的日益重视,其中包括对缺血性脑血管疾病(ICVD)的治疗。研究发现,一些信号转导通路的表达所产生的级联效应可以上调某些细胞因子的表达,进而启动内源性血管生成机制[1-2]。此中,c AMP/PKA信号通路与VEGF/VEGFR系统关系十分紧密,两者间的信号输递介入了脑缺血后微血管结构的重新构生。本课题制备大鼠局灶性大脑中动脉栓塞模型(middle cerebral artery occlusion,MOCA),并对不同时刻大鼠神经障碍水平、缺血区光镜下病理形态学特征、c AMP和VEGF的阳性水平予以观察,进一步讨论ICVD大鼠旁支循环重构机理。同时,通过观察脑脉通颗粒干预下老龄大鼠中枢系统c AMP和VEGF的动态变化探讨脑脉通保护作用机理。临床观察部分主要通过对比两组入院患者治疗不同时刻NIHSS量表、中医症状分级量表评分来评估脑脉通的临床有效性。目的:1对青年ICVD和老年ICVD大鼠病情进展的不同时刻(缺血3小时,缺血/再灌注24小时、3天、6天、12天)神经功能障碍评定。同时选用光学显微镜对大鼠缺血脑组织进行病理观察,探讨大鼠脑缺血受损机制及青、老龄间差异;2对青年ICVD组、老龄ICVD组、尼莫地平组及脑脉通组在病情进展的不同时刻(缺血3小时,缺血/再灌注24小时、3天、6天、12天)c AMP和VEGF的阳性表达进行对比,分析不同组间c AMP和VEGF阳性水平,讨论脑脉通治疗ICVD机理;3对常规治疗组及脑脉通组患者入院当天、治疗14天、28天NIHSS量表、中医症状分级(气虚血瘀证)量表评分并予以统计互比,讨论脑脉通治疗ICVD、改善患者预后的中西医综合疗效。方法:1选用Longa 8分制法(进行一定改进)评测青年ICVD小组和老年ICVD小组大鼠于病情进展不同时刻(缺血3小时,缺血/再灌注24小时、3天、6天、12天)神经功能障碍;光镜观测互比青年ICVD小组和老年ICVD小组大鼠于病情进展不同时刻(缺血3小时,缺血/再灌注24小时、3天、6天、12天)病理形态学改变;2选用免疫组化法处理动物切片,后光镜观察对比青年ICVD大鼠组、老年ICVD大鼠组、尼莫地平组及脑脉通组在病情进展不同时刻(缺血3小时,缺血/再灌注24小时、3天、6天、12天)c AMP和VEGF的阳性水平;3选用NIHSS量表、中医症状分级量表评分评估入组患者基线期(第0天)、治疗第14天、第28天病情进展和预后改善。结果:1脑脉通可降低老年ICVD大鼠神经功能障碍评分评分结果显示:尼莫地平组与老龄ICVD大鼠组进行比较,尼莫地平组I/R 24h神经功能能障碍评分降低(P<0.05),脑脉通组I/R 24h、3d降低(P<0.05)。脑脉通组与尼莫地平组比较,脑脉通组I/R 24h、36d、12d均降低。2脑脉通可减轻老年ICVD大鼠病理形态学损伤在光学显微镜下对ICVD大鼠脑组织缺血中央区及周围血供缺少带进行观察,可以明显发现在缺血3小时后逐渐出现组织水肿,微血管及神经元周围间隙逐渐增大(见照片8)。I/R 24小时镜下可见神经元、胶质细胞坏死变性,微血管结构破坏,光镜显示明显缺血中心坏死区结构,微血管、神经元细胞间隙较I/R 3小时明显扩大(照片9)。I/R 6天时微血管、神经元细胞间隙出现缩小趋势,缺血中心区结构模糊(照片11);I/R12天时镜下神经元、神经纤维数目明显减少,病灶中央坏死液化灶逐渐形成(照片12)。较之于青年ICVD大鼠组,老龄ICVD大鼠组缺血脑组织病理损伤进展速度更快,损伤水平更高,水肿消退速度亦较为缓慢;脑脉通组及尼莫地平组病理损伤程度明显优于老年ICVD组大鼠,水肿恢复速度较快,脑脉通组效果更加明显(照片14-24)。3脑脉通提高老年ICVD大鼠c AMP表达水平免疫组化观察结果提示:较之青年假手术组c AMP阳性水平,青年ICVD大鼠组各时间点均减弱,青年ICVD大鼠组I 3h、I/R 24h、3 d、6d、12 d的c AMP阳性水平均降低(P<0.05,P<0.01)。较之老年假手术组c AMP阳性水平,老龄ICVD大鼠组各时间点均减弱,老龄ICVD大鼠组I 3h、I/R 24h、3 d、6 d、12 d的c AMP阳性表达均降低(P<0.05,P<0.01)。老龄ICVD大鼠组c AMP阳性水平整体随缺血时间延长而逐渐低落,与I/R 3d时达到谷值后逐渐呈现缓慢上升,I/R6 d、12d时上升明显(P<0.05)。比之老龄ICVD大鼠组各时刻,尼莫地平组I 3h、I/R24h、3 d、6 d、12 d的c AMP阳性表达均升高(P<0.05,P<0.01)。比之老龄ICVD大鼠组各时刻,脑脉通组I 3h、I/R 24h、3 d、6 d、12 d的c AMP阳性表达均升高(P<0.05,P<0.01)。比之尼莫地平组各时刻,脑脉通组I 3h、I/R 24h、3 d、6 d、12 d的c AMP阳性表达均升高(P<0.05,P<0.01)。4脑脉通提高老年ICVD大鼠VEGF表达水平免疫组化观察结果提示:较之青年假手术组VEGF阳性水平,青年ICVD大鼠组各时刻VEGF阳性水平均上升,青年ICVD大鼠组I 3h、I/R24h、3 d、6 d、12 d的VEGF阳性水平均上升(P<0.05,P<0.01)。较之老年假手术组VEGF阳性水平,老龄ICVD大鼠组各时刻均有明显上升,老龄ICVD大鼠组I 3h、I/R 24h、3 d、6 d、12 d的VEGF阳性表达均上升(P<0.05,P<0.01)。青年ICVD大鼠组VEGF阳性水平随缺血时间延长逐步上升,与I/R 3d时达到最高后维持较高程度。老龄ICVD大鼠组VEGF阳性水平随缺血时间逐步上升,与I/R 24h时达到最高后维持较高程度。比之老龄ICVD大鼠组各时刻,尼莫地平组I 3h、I/R 24h、3d、6 d、12 d的VEGF阳性表达均升高(P<0.05,P<0.01)。比之老龄ICVD大鼠组各时刻,脑脉通组I 3h、I/R 24h、3 d、6 d、12 d的VEGF阳性表达均升高(P<0.05,P<0.01)。比之尼莫地平组各时刻,脑脉通组I 3h、I/R 24h、3 d、6 d、12 d的VEGF阳性表达均升高(P<0.05,P<0.01)。5脑脉通对老年ICVD患者神经功能障碍、中医气血运行状况的调节作用临床疗效评估结果提示:与常规治疗组相比较,治疗14天及治疗28天时脑脉通组NIHSS量表评分降低(P<0.01)。在常规治疗组14天、28天相比,脑脉通组中医症状分级量表评分都显著降低(P<0.01)。结论:1因增龄带来的中枢系统差异,老年大鼠在脑缺血后神经功能受损及病理受损程度较之青年大鼠更重,损伤进展也更快。脑脉通可明显减轻老年ICVD大鼠病理受损程度、改善神经功能障碍,与其推动脑内微血管新生、缓解能量代谢障碍有关;2老龄大鼠脑缺血后,缺血中心区及半暗带周边可发现c AMP阳性表达减弱,缺血初期(I3h-24h)随时间进行迅速降低,于I 24h时出现谷值,后缓慢回升。脑脉通通过加强c AMP在I/R不同时刻的水平,促进ICVD大鼠微血管的新生。3老龄大鼠正常状态下脑组织VEGF全脑可见、表达量较少。脑缺血后,缺血中央区可发现VEGF阳性显示,I 3h-24h逐渐增强,于I 3d时出现峰值,后缓慢回落。该特点可能为缺氧诱导因子(HIF)引发VEGF大量生成所导致。脑脉通通过增强VEGF在I/R不同时刻的水平,促进ICVD大鼠微血管的新生。