木尔坦棉花曲叶病毒的分子鉴定与致病性研究

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双生病毒是植物病毒中唯一的一类具有孪生颗粒形态的单链环状DNA病毒(single stranded DNA,ssDNA)。双生病毒科病毒可侵染双子叶和单子叶植物,在多种重要经济作物上造成严重的减产,我国番茄、烟草、南瓜、胜红蓟和赛葵等作物上也相继发现了多种双生病毒。本论文对广东地区表现为曲叶症状的扶桑上的双生病毒分离物GD37进行了基因组结构研究。对其病毒全长基因组序列测定分析表明,该序列与木尔坦棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl Multan virus,CLCuMV)G6、Nanning和Okra06的序列的同源性达到99%以上。利用DNAβ的特异性引物,从GD37中扩增到卫星DNAβ分子。序列分析表明,该DNAβ全长1347 nts,全序列与CLCuMVNanning、G6和Okra06的DNAβ同源性高达99%。GD37全长序列和DNAβ全长序列分析表明,该病毒分离物为CLCuMV。为了研究CLCuMV和CLCuMV DNAβ在致病中的作用,我们构建了CLCuMV GD37和CLCuMV GD37 DNAβ的侵染性克隆。侵染性测定表明CLCuMV GD37单独可以侵染本氏烟、普通烟、三生烟和心叶烟,但不能产生任何症状或症状轻微,只有与CLCuMV GD37 DNAβ共同侵染时才能诱导产生叶片卷曲、矮化的病害典型症状。Southern印迹检测表明,CLCuMV GD37 DNAβ依赖于辅助病毒进行复制,而DNAβ可以增强病毒在植物中的积累水平,使被病毒侵染的植株显现典型症状。为探索利用CLCuMV在植物上建立高效沉默体系的可行性,我们将CLCuMV和异源卫星分子TYLCCNV DNAβ侵染本氏烟,病株出现明显的曲叶、矮化、耳突,虽然侵染效率较低,但说明CLCuMV能支持异源卫星分子TYLCCNV DNAβ的复制。利用CLCuMV和异源TbCSV DNA 1沉默载体侵染性克隆2mDNA1-NbSu351共同侵染本氏烟,感病植株出现系统叶叶脉和主干白化,呈现明显的Su沉默表型,说明CLCuMV能支持异源TbCSV DNA 1沉默载体侵染性克隆的复制,并能引起植物内源基因的高效沉默。
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