【摘 要】
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目的:探讨抗紫外线辐射相关基因(UV radiation resistance-associated gene,UVRAG)是否参与K562白血病细胞铁死亡过程,为进一步研究铁死亡在白血病中的作用以及可能为白血病新
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目的:探讨抗紫外线辐射相关基因(UV radiation resistance-associated gene,UVRAG)是否参与K562白血病细胞铁死亡过程,为进一步研究铁死亡在白血病中的作用以及可能为白血病新的治疗手段提供理论思路与实验线索。方法:1.设置K562白血病细胞铁死亡诱导不同浓度组(Erastin浓度分别10?mol/L、20?mol/L、40?mol/L、60?mol/L、80?mol/L)、空白对照组,采用铁试剂盒分别于24h、48h及72h检测不同浓度下细胞细胞内Fe2+浓度评价铁死亡过程,结合细胞形态找出最佳给药浓度及最佳药物处理时间;2.设置K562白血病细胞诱导组(Erastin)、抑制组(Liproxstatin-1)、空白对照组,采用Western Blot分别检测不同组UVRAG蛋白表达情况;3.设置K562白血病细胞siRNA-UVRAG组、siRNA-UVRAG+Erastin组、诱导组(Erastin)、空白对照组,采用铁试剂盒分别评价不同组别铁死亡情况。结果:1.Erastin作用于K562白血病细胞,随着Erastin浓度增加,K562细胞数目明显减少,细胞形态出现不规则、胞膜变形,细胞碎片增多,细胞活性下降,血清铁浓度逐渐上升,提示铁死亡程度增强,在48小时、40?mol/L Erastin组最明显(P<0.05)。2.诱导组与空白组对照比较,诱导组UVRAG蛋白表达上调(P<0.05);抑制组与空白对照组比较,诱导组UVRAG蛋白表达下调(P<0.05)。3.siRNA-UVRAG组与空白对照组比较,血清铁浓度差异无统计学意义(P>0.05);siRNA-UVRAG组与siRNA-UVRAG+Erastin组比较,血清铁表达差异不明显(P<0.05);siRNA-UVRAG+Erastin组与诱导组比较,血清铁浓度明显下降(P<0.05)。结论:1.Erastin处理K562白血病细胞最适浓度为40?mol/L,最佳时间为48小时;2.UVRAG参与K562白血病细胞铁死亡过程。
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