【摘 要】
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α-半乳糖苷酶(α-galactosidase,α-D-galactoside galactohydrolase;EC 3.2.1.22)也称蜜二糖酶,是一种外切糖苷酶,催化移除不同底物中α-连接的末端非还原性D-半乳糖。α-半乳糖苷酶在医疗、食品、化工及饲料等方面都有着广泛的应用前景。在饲料工业中,α-半乳糖苷酶添加剂是去除豆粕中α-半乳糖苷寡糖类抗营养因子的首选方法,但是目前饲用α-半乳糖苷酶
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α-半乳糖苷酶(α-galactosidase,α-D-galactoside galactohydrolase;EC 3.2.1.22)也称蜜二糖酶,是一种外切糖苷酶,催化移除不同底物中α-连接的末端非还原性D-半乳糖。α-半乳糖苷酶在医疗、食品、化工及饲料等方面都有着广泛的应用前景。在饲料工业中,α-半乳糖苷酶添加剂是去除豆粕中α-半乳糖苷寡糖类抗营养因子的首选方法,但是目前饲用α-半乳糖苷酶的生产目前尚未形成产业化,其中,性质优良的a-半乳糖苷酶的发掘是一个亟待解决的关键问题。乳酸菌作为人们日常生活中的食用添加菌种已有上百年的历史了,尚未见任何明显得副作用,所以我们从此入手研究产a-半乳糖苷酶的乳酸菌,为工业化大规模生产提供一些必要的科学依据。本实验从分离于泡菜的乳酸菌中筛选出了16株具有α-半乳糖苷酶活性的菌株,分别来源于6个不同的种。从每个种中挑选一株进行了α-半乳糖苷酶的生化特性研究。六株菌的粗酶液均表现出较高的α-半乳糖苷酶活性,其中来源于干酪乳杆菌g4-1最高酶活力达到了19.7 U/ml,所有α-半乳糖苷酶活性的差异明显,都有不同的最适温度和最适pH值。六株菌都能有效的降解棉子糖,其降解产酸能力与酶活性有着直接的联系。为了进一步克隆表达α-半乳糖苷酶基因的需要,我们挑选了g4-1作为研究对象,对其粗酶液的α-半乳糖苷酶温度、pH的稳定性及金属离子Cu2+,Fe3+,Cd2+,Ni+,Zn2+,Mg2+的影响进行了研究。实验结果表明g4-1α-半乳糖苷酶高温不稳定,酶活对pH比较敏感,在pH5以下及pH8以上α-半乳糖苷酶稳定性较差,在pH5-8之间保存一小时,酶活均达到50%以上。大多数金属离子对酶活性没有很大影响,只有Ni+使酶活性降到45.27%。利用Cazy数据库中已登录的干酪乳杆菌的a-半乳糖苷酶的序列进行了比对,设计了两条特异性引物,PCR扩增出了一条大小为2292bp的agaⅠ基因,将该基因连接到pET-29a上,在E.coil BL21中进行了重组表达。BL21-PA8重组粗酶液的酶活力高达18.8U/ml。
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