内皮细胞功能紊乱与动脉粥样硬化、冠心病、高血压、心肌缺血、血栓等多种疾病的发生和发展密切相关，细胞膜蛋白在维持内皮细胞生理功能方面起关键作用，其中内皮细胞乙酰胆碱靶标（endothelial target for acetylcholine，ETA）的功能低下已成为检验血管内皮细胞功能紊乱的关键性技术指标。本研究采用药理学、双向电泳技术、蛋白质质谱和噬菌体抗体库等技术，研究了体外培养对内皮细胞蛋白表型的影响，构建了动脉内皮细胞膜蛋白抗体库，分析了ETA和M受体之间的差异，为研究内皮细胞膜蛋白和发现新的药物作用靶标提供技术平台。 1．作为判断内皮细胞功能是否正常的标志性膜蛋白，ETA不同于M受体：M₃受体特异性单克隆抗体可拮抗M₃受体功能，但不影响ETA功能；毛果芸香碱可激活所有亚型的M受体，但不能激活ETA。 2．毛果芸香碱对ETA呈非竞争性拮抗作用，可作为区分ETA和M受体的工具药。 3．在2000株内皮细胞膜蛋白的噬菌体抗体中，筛选出ETA相关的单链抗体，该抗体可特异性与内皮细胞膜蛋白结合，并可拮抗ETA功能，阻断ETA介导的内皮依赖性舒张反应，但不影响M受体功能。 4．在近100个体外培养导致蛋白表达下调的内皮细胞特异蛋白中，发现两个新的蛋白质，分子量分别为43.8kD和59.5kD，等电点分别为3.76和6.46，可作为ETA候选蛋白质作进一步研究。 5．应用双向电泳和蛋白质质谱等技术，研究了体外培养传代的内皮细胞，即便在其形态学及其特异性标志物（Ⅷ因子）无显著性变化的前提下，其蛋白质表型发生显著的改变。在近百个差异表达的蛋白质中，发现以下调性变化为主，但也发现上调性变化，并出现了新增蛋白质点。在上述变化中包括ETA的功能降低。此结果为内皮细胞体外实验模型提供了基础数据。 6．应用基因重组和噬菌体展示等技术，构建了内皮细胞膜蛋白的噬菌体抗体库，该库的容量可达8×10⁶水平。进一步基于动脉与静脉内皮细胞蛋白质表达的差异性，进行减差筛选，富集到约2000株的动脉内皮细胞特异性膜蛋白噬菌体抗体，为研究动脉受损为标志的动脉粥样硬化等心血管常见疾病提供技术平台。