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癌症一直以来是世界上死亡率最高的疾病之一,而肺癌的发病率与死亡率在全世界居首位,肺癌的防治已成为重中之重。如今针对癌症的各种化疗、放疗、靶向、免疫等治疗,虽然能在一定程度上延长生存期,但患者的生活质量并不佳,而近年来有些中药在某些癌症的治疗上已呈现出很好的疗效,也越来越多的被研究。本实验分别验证了中药鹅不食草(Centipeda minima,CM)的单体成分和中药猪牙皂(Gleditsiae fructus abnormalis,GFA)的抗肺癌作用,为中药鹅不食草抗肺癌作用的研究以及两药的临床应用做铺垫。1.32种鹅不食草抗肺癌有效单体的筛选及作用研究目的:我们先前发现,鹅不食草成分6-氧-当归酰多梗白菜菊素(6-O-angeloylplenolin,6-OAP)具有较强的抗肺癌活性。本文在32种鹅不食草单体中筛选具有抗肺癌活性的有效成分,并探究其抗肺癌的作用机制。方法:采用MTT比色法检测化合物对5种人肺癌细胞系的增殖抑制作用,筛选出活性较好的单体化合物;流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot检测细胞凋亡、自噬相关蛋白及p-AKT、p-ERK的表达;同时检测了该化合物对免疫检查点蛋白PD-L1的影响。结果:我们发现有10种(31.3%)成分在20 μM浓度条件下能使H460、A549细胞的增殖活性抑制15%以上。三种化合物阿里二醇(CM-19,Arnidiol)、6-OAP(CM-25)及Helenalin-isovalerate(CM-26)在2.5～20 μM范围内对肺癌细胞具有较明显的抑制作用,且CM-26的抗肺癌活性更高一些;流式分析可见CM-26能够显著诱导肺癌细胞凋亡(P<0.01),且Western Blot结果显示与对照相比,CM-26能以浓度依赖性的方式活化Caspase-3、Caspase-8,使其活化片段表达增高,而Caspase-3底物PARP被降解;CM-26能以浓度依赖性的方式促进自噬标志蛋白LC3的表达并抑制p-AKT、p-ERK的表达,同时CM-26使肺癌细胞PD-L1的表达量增高。结论:鹅不食草含有多种具有抗肺癌活性的成分,能显著抑制肺癌细胞增殖并诱导其凋亡及自噬,其产生抗肺癌作用的机制可能与抑制p-AKT、p-ERK的表达有关;CM-26不能抑制PD-L1的表达。2.中药猪牙皂的抗肺癌活性研究目的:在体内体外探究中药猪牙皂的抗肺癌活性。方法:在体外采用MTT法检测猪牙皂在H1299、A549、H460肺癌细胞上的增殖活性,并用流式细胞术检测猪牙皂对H1299细胞周期、凋亡的影响,用Western Blot检测与细胞周期及凋亡相关蛋白的表达;体内用LLC(小鼠肺癌细胞)尾静脉注射C57小鼠,构建原位荷瘤模型,两天后,通过灌胃给予猪牙皂治疗21天(分三组:ddH20,20 mg/kg,40mg/kg),接种38天后,同时处死,解剖取肺拍照、称重,统计数据,检测猪牙皂对小鼠的抗肺癌效果。结果:在体外,猪牙皂抑制了肺癌细胞H1299、A549、H460的增殖,且随着给药浓度的提高抑制作用也增强,相比其它细胞,H1299细胞对猪牙皂更加敏感;流式结果显示,当猪牙皂浓度为50 μg/mL时,处理H1299细胞48h后能够显著诱导其细胞凋亡(P<0.01),猪牙皂能够显著把肺癌细胞H1299的细胞周期阻滞在G2/M期(P<0.01);Western Blot结果说明,与对照组相比猪牙皂能够以浓度依赖的方式使凋亡标志蛋白PARP出现切割带,并能够抑制周期蛋白Cyclin D1的表达。在体内,高、低剂量给药组的小鼠与对照组小鼠相比,肿瘤的重量显著减轻(P<0.01)。结论:猪牙皂可能通过诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期来抑制肺癌细胞的增殖;猪牙皂在小鼠体内具有很好的抗肿瘤效果。