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动脉粥样硬化(AS)是威胁人类健康的常见心脑血管系统的疾病，常累及大中型血管，以血管内皮细胞内和细胞间大量脂质堆积、单核/巨噬细胞浸润、泡沫细胞形成、血管平滑肌增殖等为特征。在AS发生发展过程中，氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)通过细胞表面清道夫受体(SR)被细胞摄取，使其形成泡沫细胞。泡沫细胞大量沉积在血管壁是AS发生的标志。SR在摄取脂质时不受胞内脂质代谢负反馈调节，可使细胞无限制的摄取ox-LDL，使其在细胞内不断堆积，导致细胞破裂形成血管壁脂质斑块。同时，血管内皮细胞也通过SR摄取ox-LDL，除引起内皮细胞脂质堆积外，还引发一系列内皮细胞功能紊乱，这更加剧了AS的进展。LOX-1是一种新型的清道夫受体，最早发现于牛血管内皮细胞表面，随后研究发现巨噬细胞，平滑肌细胞上也有表达。LOX-1在结构上与已知的SR家族其他成员不同，在功能上有所较大差异。巨噬细胞上的LOX-1能增加细胞对脂质的摄取，参与泡沫细胞的形成；而表达于内皮细胞表面的LOX-1与ox-LDL结合后可活化ox-LDL/LOX-1系统，从而引起内皮细胞的一系列功能改变，引起血管平滑肌细胞增殖，逐步向内膜迁移，加剧管腔狭窄，促进AS的进展。目前研究已证实LOX-1作为SR家族的一员，在脂质结合与代谢中有重要作用，但是，对于LOX-1在众多致AS因素中的关键作用尚不十分清楚，尤其阻断LOX-1功能后细胞功能变化的报道亦不多见。本实验室曾对SR家族众多成员在泡沫细胞形成过程中的功能进行过系统研究，本课题在前期实验的基础上，进一步探讨了LOX-1与ox-LDL特异性结合能力以及阻断LOX-1后相应细胞功能的变化，明确了LOX-1在脂质代谢中的重要作用，为进一步探讨LOX-1与脂质结合的关键位点提供了有效的研究手段。
本课题利用佛波醇酯(PMA)诱导人单核细胞株THP-1形成巨噬细胞，并从该细胞中获得cDNA文库，采用分子克隆方法得到LOX-1基因片段，利用EGFP-C1质粒作为克隆载体，通过脂质体转染法使低表达SR的293T细胞过表达LOX-1，并能与ox-LDL特异性结合。再采用RNAi技术对该受体沉默后观察细胞与ox-LDL结合变化，设计了针对LOX-1的3个SiRNA干扰片段，并利用pSilence1.0质粒作为载体，构建了3个干扰质粒。用脂质体转染法分别将它们转染到过表达LOX-1的293T细胞中。通过聚合酶链反应方法(RT-PCR)，Westernblotting以及流式细胞技术(FACS)成功筛选出了针对LOX-1的高效干扰片段SiRNA1。
本研究成功的建立起了过表达LOX-1的293T细胞模型，研究结果显示：在原本低表达SR的293T细胞中成功转染LOX-1后，细胞与脂质结合能力明显增强（增加了6.3倍）。同时，构建并筛选出了以CTG AAT GAG AAA TCC AAAGA为靶序列的短发夹RNA重组质粒，该质粒可特异性的沉默LOX-1基因的表达，mRNA水平沉默效率80％，蛋白水平沉默效率达86%，LOX-1基因沉默以后与过表达LOX-1的293T细胞相比，结合ox-LDL的能力下降73%。以上结果显示LOX-1在脂质结合方面有重要作用，同时本课题中所构建的质粒及细胞模型为以后进一步研究LOX-1功能提供了有效的研究工具。