【摘 要】
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该文设计了切割蜜瓜成熟果实ACC氧化酶mRNA的GUC、GUC、GUC的三重锤头型核酶(HhRz)和阻断转录的反义RNA(AR)基因,委托大连宝生物工程公司合成,通过测序证明序列为正确.HhRz对
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该文设计了切割蜜瓜成熟果实ACC氧化酶mRNA的GUC<86>、GUC<388>、GUC<534>的三重锤头型核酶(HhRz)和阻断转录的反义RNA(AR)基因,委托大连宝生物工程公司合成,通过测序证明序列为正确.HhRz对ACC氧化酶mRNA的体外、体内切割实验提示我们设计合成的核酶对ACC氧化酶mRNA可能起作用.在体外分别转录出ACC氧化酶mRNA和核酶基因单体、八联体mRNA,混合作用并进行PAGE分析,表明核酶对ACC氧化酶mRNA具有切割作用.在E.coliDE3rna-体内诱导表达(HhRz-AR)n(n=1 or 8)和靶子ACC氧化酶mRNA,提取其总RNA,进行Northern杂交分析了核酶对ACC氧化酶mRNA的切割作用.为了在植物体内检测(HhRz-AR)n对ACC氧化酶mRNA的作用,用HindⅢ/Kpn切取pBS01和pBS08中含有(HhRz-AR)n(n=1 or 8)基因的片段,分别克隆到了植物双元表达载体pGA643的CaMV 35S组成型启动子下游,命名为pGR01和pGR08.
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