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鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer,R.anatipestifer）是一种可感染鸭、鹅、火鸡等多种禽类的革兰氏阴性菌,严重危害养鸭业生产,造成重大经济损失。目前已确定的鸭疫里默氏杆菌血清型有21种,不同血清型之间无交叉保护,给有效的疫苗预防增加了很大难度。因此,目前主要采用抗生素来预防和治疗鸭疫里默氏杆菌感染,而抗生素的广泛使用导致鸭疫里默氏杆菌对多种抗生素产生耐药性,并且耐药菌株不断产生。基于此,探索鸭疫里默氏杆菌的耐药机制成为目前的重点研究方向之一,以便为降低该菌的耐药性以及提高抗生素的应用效果提供理论依据。目前,对鸭疫里默氏杆菌的耐药机制了解甚少。初步研究表明,鸭疫里默氏杆菌携带的钝化酶介导对氨基糖苷类药物耐药;位于gyrA基因上的抗性决定区的突变是介导鸭疫里默氏杆菌抗喹诺酮类抗生素的机制;外排泵是鸭疫里默氏杆菌耐多种抗生素的主要机制;鸭疫里默氏杆菌携带1、2类整合子和多种耐药基因盒,并与其耐药谱相关;整合子也是介导该菌耐药的机制。本研究系统鉴定了鸭疫里默氏杆菌的ABC外排泵基因RIA1614在药物外排、菌株生长和菌株毒力三个方面的生物学功能。通过供体菌与受体菌共培养,利用接合转移和同源重组的方法,构建了RA-GD菌株的RIA1614基因缺失株RA-GD△RIA1614和回复菌株RA-GDc△RIA1614。研究了鸭疫里默氏杆菌RA-GD菌株中RIA1614基因的生物学功能,抗生素敏感性试验表明,RIA1614基因缺失株RA-GD△RIA1614比亲本株RA-GD和回复菌株RA-GDc△RIA1614对氨基糖苷类药物和有机溶剂更敏感;当亲本株RA-GD和回复菌株RA-GDc△RIA1614暴露于氨基糖苷类和有机溶剂的亚抑制水平时,RIA1614基因的转录水平显著上调。链霉素累积试验表明,RIA1614基因能外排链霉素,即进一步表明该基因为外排泵基因。生长曲线显示,与亲本株RA-GD和回复菌株RA-GDc△RIA1614相比,缺失株RA-GD△RIA1614的生长速率没有显著变化,但是其体外竞争试验表明,缺失株RA-GD△RIA1614的体外竞争能力与亲本株RA-GD相比降低5.5倍,与回复株RA-GDc△RIA1614相比降低1.8倍,即RIA1614基因缺失后鸭疫里默氏杆菌RA-GD的体外竞争能力下降。LD50测定结果表明,缺失株RA-GD△RIA1614的毒力比亲本株RA-GD下降43倍,比回复菌株RA-GDc△RIA1614下降12倍。本研究结果表明,RIA1614基因赋予鸭疫里默氏杆菌对氨基糖苷类药物和有机溶剂的耐药性,也是鸭疫里默氏杆菌的毒力因子之一。通过研究结果和氨基酸序列分析我们证实了RIA1614基因属于ABC外排泵,其编码蛋白命名为鸭疫里默氏杆菌ABC外排泵的MarB蛋白。本研究成功构建了RA-GD菌株的RIA1614基因缺失株RA-GD△RIA1614和回复菌株RA-GDc△RIA1614,并且缺失株和回复菌株能稳定传代。鉴定了ABC外排泵基因RIA1614赋予鸭疫里默氏杆菌对氨基糖苷类药物和有机溶剂的耐药性,也是鸭疫里默氏杆菌的毒力因子之一。