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传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)引起的急性、高度接触性传染病。该病主要侵害3-6周龄雏鸡的中枢免疫器官—法氏囊,有人形象地称该病为鸡的―艾滋病‖。随着IBDV的不断进化变异,先后出现了经典毒株(classic IBDV,c IBDV)、变异毒株(variant IBDV,v IBDV)以及超强毒株(very virulent IBDV,vv IBDV),vv IBDV的高致死率给世界养禽业带了巨大的经济损失。近年来,在流行病学研究不断深入及反向遗传学技术日趋成熟的基础上,作为IBDV外层衣壳唯一组成成分的VP2蛋白,已被确认为是决定病毒毒力及细胞嗜性差异的重要分子基础。然而IBD发生与发展的实质是IBDV与宿主细胞相互博弈的过程。尽管在病毒层面已表明VP2蛋白对IBDV的细胞嗜性和毒力有重要影响,然而VP2蛋白在宿主细胞内的具体作用依然还不清楚。因此,深入了解VP2蛋白与宿主细胞的相互作用已成为目前揭开IBDV致病和免疫机制的研究重点。本研究从病毒与宿主相互作用的角度,采用不同的蛋白相互作用技术,以VP2蛋白为诱饵筛选出与其相互作用的宿主蛋白,并进一步探索它们在IBDV复制过程中的分子作用机制。首先,以免疫共沉淀技术与质谱技术相结合,在感染IBDV的易感细胞DF1中,利用VP2蛋白的特异性单克隆抗体,鉴定出了一个互作候选蛋白酪蛋白激酶CK1α。免疫共沉淀及激光共聚焦试验进一步证实,CK1α与VP2在IBDV感染过程中存在相互作用。与此同时,我们发现在IBDV复制过程中,CK1α呈下调表达。基因表达调控实验表明,CK1α下调表达能够抑制IBDV复制,反之则促进IBDV复制,另外CK1α激酶活性抑制剂D4476也会抑制IBDV复制,这表明CK1α对IBDV复制的影响与其激酶活性有关。综上,CK1α在IBDV复制过程中的下调表达可能是宿主抵抗IBDV的一种抗病毒应答。为深入揭示宿主通过下调CK1α来限制IBDV复制的分子机制,我们经过探索发现,IBDV感染能够诱导产生IFN-β,而CK1α过表达能够拮抗IFN-β的抗病毒效应,但这种拮抗作用不是源于对IFN-β本身表达量的负调控,而是源于对IFNAR1稳定性的负调控。CK1α负调控IFNAR1稳定性的具体机制是,CK1α能够泛素化降解IFNAR1。IFNAR1的C端胞内区存在一个保守的降解决定子序列,它与IFNAR1的泛素化密切相关,其磷酸化位点S545是CK1α发挥调控功能的关键位点。点突变实验证实,S545A的确能够削弱CK1α介导的IFNAR1泛素化。IBDV感染宿主细胞的过程中,在发现CK1α下调的同时,也发现了IFNAR1在细胞膜表面上的分布增加。因此我们认为,CK1α作为宿主的一种感应分子,在IBDV感染后被下调,进而通过负调控机制导致IFNAR1的上调,从而增强宿主限制IBDV复制的能力。在宿主的抗病毒压力下,病毒也进化出多种机制来利用宿主细胞的资源而利于自身复制。本研究还鉴定了另一个有利于IBDV复制的宿主细胞蛋白——高尔基体膜蛋白硫酸软骨素N-乙酰氨半乳糖胺基转移酶(CSGal NAc T2)。CSGal NAc T2能够与VP2蛋白在高尔基体上发生相互作用。结合基因芯片分析结果及荧光定量检测结果,我们证实,CSGal NAc T2在IBDV感染过程中表达上调,而CSGal NAc T2上调表达能够促进IBDV的复制,且此种促进作用依赖于高尔基体结构的完整性。高尔基体是IBDV“复制工厂”核糖核蛋白复合体(RNP)的所在地,VP2与CSGal NAc T2的相互作用进一步表明,IBDV能够利用宿主蛋白CSGal NAc T2招募VP2到高尔基体从而利于自身的组装和增殖。本研究首次发现了不同宿主蛋白与IBDV衣壳蛋白VP2互作所触发的宿主细胞对病毒复制不同的调控效应,揭示了在IBDV感染过程中CK1α触发的抗病毒机制,以及CSGal NAc T2介导的促进病毒复制的分子机理,对于深入认知IBDV的致病和免疫机制具有重要意义。