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目的(1)利用全外显子组测序技术鉴定原发性纤毛运动障碍(PCD)男性不育患者的致病基因。(2)观察PCD男性不育患者通过卵细胞质内单精子注射(ICSI)助孕治疗后的临床妊娠结局。方法(1)选取于2018年2月至2019年10月在安徽医科大学第一附属医院生殖医学中心就诊的患有原发性不育症的PCD患者为研究对象,通过问卷调查了解所有研究对象的临床一般资料,抽取患者及父母的外周血并留取患者的精液样本,提取外周血DNA行全外显子组测序,对患者及其父母行Sanger测序验证,初步筛选出致病基因,然后通过精子涂片HE染色、精子扫描电子显微镜、精子透射电子显微镜、实时荧光定量PCR(q PCR)和精子免疫荧光等实验来对候选基因的致病性进行验证。(2)对6例PCD患者采取ICSI助孕治疗,ICSI治疗时首选精液中的活动精子,如不能找到活动精子则采取ICSI吸管测试精子尾部的弹性来评估精子活力,观察ICSI受精率、卵裂率、胚胎发育率并随访妊娠结局,同时将这些患者的ICSI结果与8例DNAH1突变的精子鞭毛多发畸形(MMAF)患者和215例严重少弱畸精子症(OAT)患者的ICSI结果进行比较。结果(1)通过全外显子组测序法在6例PCD患者中发现3例患者存在基因突变,分别为新发DNAAF1纯合非同义突变c.T440G(p.L147R)、新发RSPH3纯合非同义突变c.C799T(p.Arg267Cys))和SPAG6复合杂合突变(c.143＿145del(p.48＿49del)和c.585del A(p.Lys196Serfs~*6)),Sanger测序验证了这些突变分别在患者各自的家系中存在共分离现象。精子涂片HE染色和扫描电镜显示了DNAAF1突变患者精子为多种鞭毛形态异常与正常形态混合表型,SPAG6与RSPH3突变患者精子鞭毛表现为多种形态异常。透射电镜显示DNAAF1突变患者精子鞭毛超微结构为内、外动力蛋白臂的缺失或内、外动力蛋白臂的缺失伴外周微管的排列紊乱,RSPH3突变患者精子鞭毛超微结构为放射轴辐的完全缺失或部分缺失,SPAG6突变患者精子鞭毛超微结构为“9+0”或“9+1”结构。精子q PCR和免疫荧光实验结果显示了DNAAF1、RSPH3及SPAG6突变患者精子m RNA表达水平的显著降低和蛋白的降解。(2)6例PCD患者及其伴侣共接受了7个ICSI周期,受精率、囊胚形成率和临床妊娠率分别为69.5%,49.1%和71.4%,其中5对夫妇获得了妊娠并各分娩一个健康的孩子。6名PCD患者的ICSI结果与8名已知为DNAH1基因突变的MMAF患者和215名OAT患者的ICSI结果通过统计比较显示:PCD组与其他两组在受精率、卵裂率、胚胎发育率(8细胞和囊胚形成)、着床率及临床妊娠率之间均没有显著性差异。结论纤毛相关基因DNAAF1、RSPH3及SPAG6中存在新的突变位点导致PCD和男性不育。ICSI助孕治疗是PCD男性不育患者获得生物学子代的有效治疗方法。