食管癌是中国最常见的恶性肿瘤之一,河北省磁县更是我国食管癌高发地区之一,据调查,在我国高发区食管癌具有明显阳性家族史和家族聚集性,在我们的前期流行病调查中,70％的磁县食管癌患者具有明确食管癌家族史。虽然近10年来人们在寻找食管癌相关蛋白方面作了大量工作,但至今未发现与食管癌发生密切相关的蛋白。为了较好的分析与食管癌发生有关的蛋白质,本实验对河北省磁县家族性食管癌患者(具备环境因素和遗传背景的相似性,可减少多种混杂因素对实验结果的影响)进行了研究,旨在寻找并验证与食管癌发生相关的蛋白质。　　 肿瘤蛋白质组技术已成为目前科技研究的前沿领域,特别是在肿瘤标志物的筛选方面更有优势,本实验采用蛋白质双向凝胶电泳技术对同一患者食管癌组织和正常食管粘膜组织(距肿瘤边缘5厘米以上的食管粘膜组织)的蛋白质表达谱进行自身对照分析,建立高分辨的2D图谱,并对部分差异表达的蛋白质进行质谱分析,探讨与食管癌发生可能相关的特异性差异蛋白。　　 在此基础上,我们在寻找到的与食管癌发生可能相关的特异性差异蛋白中挑选RegⅠα仅蛋白,应用ELISA的方法分析食管癌患者血清中该蛋白的表达情况,进一步验证RegⅠα蛋白与食管癌发生发展的相关性。　　 第一部分食管癌组织的蛋白质组学分析　　 目的:探讨具有家族史的食管癌组织和正常食管组织内蛋白质组的表达差异,为寻找参与食管癌发生的相关蛋白奠定基础。　　 方法:实验所用食管癌组织及正常食管粘膜组织标本取自河北省磁县具有不同癌性家族史的食管癌患者10例,其中男性患者6例,女性患者4例,术后病理论断由河北省磁县医院病理科和河北省人民医院病理科共同诊断证实为不同阶段的食管鳞状细胞癌。　　 应用双向凝胶电泳方法对所得的蛋白质表达谱进行自身对照分析,每个标本的双向凝胶电泳均同时做3张,目的是验证组织蛋白质谱的可靠性。应用ImageMauster2 Delite凝胶分析软件对10对标本中的位点特征基本相同的蛋白质点进行定位。并以双盲法对所选蛋白质点进行割取、处理、质谱分析和数据库查询。　　 结果:10例食管癌组织中有(45±12)个蛋白为新增蛋白,同时相对正常食管组织中有(9±3)个蛋白缺失,随机选择其中的18个位点进行质谱分析发现,9个蛋白质与肿瘤细胞的增殖、分化和肿瘤转移有关。其中8个在肿瘤组织中特异表达,1个缺失。肿瘤组织表达的8个蛋白分别为:突变β-球蛋白、AnnexinⅠ/Ⅱ、锌指蛋白14、未命名蛋白、再生基因1蛋白、nm23、热休克蛋白(HSP)70。　　 结论:1建立了分辨率较高的食管癌组织双向电泳图谱。2识别鉴定出了部分与肿瘤相关的蛋白质,为进一步筛选食管癌特异性的分子标志物奠定了基础。　　 第二部分在食管癌患者血清中检测RegⅠα蛋白的临床意义　　 目的:检测RegⅠα蛋白在食管鳞状细胞癌患者血清中的表达,并分析其表达水平与食管癌临床病理学特征的关系。　　 方法:40例食管癌患者为河北省人民医院胸外科与河北医科大学第四医院胸外科2008年9月～2008年10月的手术患者,术后病理论断由河北省人民医院病理科及河北医科大学第四医院共同诊断证实,诊断有差异者请第三家医院会诊。依据术后病理将40例食管癌患者分成不同亚组。应用酶联免疫(ELISA)的方法检测患者血清RegⅠα蛋白水平。结果判断:每个标准品和标本的OD值减去零孔的OD值,根据标准品浓度及吸光度做出标准曲线,根据各待测样品吸光度在标准曲线上读出相应浓度,再根据稀释倍数计算出实际浓度。　　 统计学方法:应用SPSS11.0对所有数据进行t检验和方差分析,P≤0.05表明有统计学意义。　　 结果:①血清中RegⅠα蛋白在食管癌手术切除后,表达水平明显下降(P<0.001),术后7天,其水平接近于正常水平。②RegⅠα蛋白在肿瘤大小为≤3cm,介于3cm到5cm,≥5cm三组患者血清中的表达值分别为20.12±1.67ng/L、24.32±3.16 ng/L、29.67±4.24 ng/L,经分析P=0.974,无统计学意义。③RegⅠα蛋白在高、中、低分化鳞癌患者血清中的表达值分别为20.78±1.27 ng/L、24.27±2.36 ng/L、31.33±4.81 ng/L,经分析P=0.001,差异有统计学意义。④按浸润深度分为浸润到粘膜层、浅肌层、深肌层、纤维膜、周围组织5组,患者血清中Reg Ia蛋白的表达值分别为22.65±3.24 ng/L,24.50±4.25 ng/L,26.23±5.39 ng/L,25.38±7.79 ng/L,25.03±8.49 ng/L,经分析P=0.874,差异无统计学意义。⑤在有、无淋巴结转移的患者血清中RegⅠα蛋白的表达值分别为29.56±3.86 ng/L、21.31±2.22 ng/L,经分析P=0.003,差异有统计学意义。　　 RegⅠα蛋白的表达强度与食管癌的大小、浸润深度无明显相关,但与食管鳞癌分化程度、淋巴结是否转移明显相关,随着分化程度的减低RegⅠα蛋白的表达强度逐渐增高,有淋巴结转移组患者血清中RegⅠα蛋白的表达强度明显高于非转移组。　　 结论:1 RegⅠα蛋白表达与食管鳞癌的不同分化程度及有无淋巴结转移有相关性。2 RegⅠα蛋白表达与食管鳞癌的肿瘤大小与浸润深度无相关性。