卵巢癌在女性生殖系统恶性肿瘤中的死亡率最高，获得诊断时大部分病人已经处于晚期，尽管进行了手术及术后化疗，总的5年生存率仍为20-30％，大部分病人死于肿瘤复发及细胞毒化疗药物的毒性作用和耐药。因此，寻找毒副作用小又能延迟肿瘤复发的巩固治疗药物对于卵巢癌的治疗十分重要。维甲酸，作为一类经典的细胞诱导分化剂，近来已显现出其对卵巢上皮性癌的抗增殖、诱分化、促凋亡作用，且具备毒副作用小等优点，与我们所要求的相符。本文重点在受体水平观察全反式维甲酸(All-trans retinoic acid, ATRA)对卵巢癌细胞株COC2的抑癌作用，并对其机制进行探讨。第一部分全反式维甲酸对卵巢上皮腺癌细胞株COC2的作用目的观察不同浓度的全反式维甲酸(ATRA)对卵巢上皮性腺癌细胞COC2的抑制作用。方法将相同条件下培养的相同细胞密度的30瓶COC2细胞按随机数字表随机分成以下几组进行干预，每组5瓶细胞：1)对照组；2)ATRA组：分别给予1、5、10、20、30μmol／L的ATRA，在相同条件下进行细胞培养，采用直接细胞计数法计算一定时期内的细胞密度情况；利用倒置显微镜和电镜观察细胞形态学改变及细胞结构变化。结果1．COC2细胞生长的剂量效应变化：通过直接计数法计算细胞密度我们发现，ATRA浓度在1-20μmol／L之间，随ATRA给药浓度的增加，COC2细胞的细胞密度逐渐下降，与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.001)2．倒置显微镜下观察肿瘤细胞的形态学变化：在72小时内镜下见对照组细胞已有重叠生长，1μmol／L加药组72小时内镜下与对照组无明显差异，5-20μmol／L浓度组细胞随浓度增加密度下降明显，在30μmol／L加药组随时间延长而细胞碎片明显增多，至72小时后无明显存活细胞。3．电镜下观察肿瘤细胞结构变化：电镜下见对照组细胞形态不规则，细胞核大，核仁明显，胞质少，胞质内未见明显糖原颗粒；经ATRA10μmol／L干预后细胞胞质比例明显增加，细胞器较丰富，糖原颗粒易见，还易见凋亡，细胞核染色质边聚，核固缩呈团块状，胞质内结构不清，可见细胞溶解坏死。结论ATRA在有效浓度范围1-20μmol／L之间，随给药浓度的增加，COC2细胞的细胞密度逐渐下降，与对照组相比差异均有统计学意义(F=128.71，P＜0.001)，说明ATRA对卵巢癌COC2细胞有一定的抑制作用。第二部分实时定量PCR检测ATRA作用前后的卵巢癌细胞株COC2中维甲酸受体表达变化目的检测全反式维甲酸(ATRA)作用前后的卵巢癌COC2细胞中维甲酸受体RARαmRNA和RXRαmRNA的表达改变情况，从分子生物学水平探讨全反式维甲酸对卵巢癌细胞的作用。方法将卵巢癌细胞COC2按加药干预情况进行分组，1)对照组；2)干预组：分别给予1、5、10、20μmol／L的ATRA进行加药干预，置入相同条件下培养，72小时后分别提取细胞总RNA，逆转录cDNA，利用实时定量PCR方法检测经不同浓度的ATRA干预前后的卵巢癌COC2细胞中维甲酸受体RARα和RXRαmRNA的表达，在ABI-PRISM 7000全自动荧光定量PCR仪上得到各实验组RARαmRNA、RXRαmRNA及GAPDH的扩增曲线、标准曲线以及Ct值，根据公式计算得出浓度值，各实验组浓度值与GAPDH浓度值之比即为各组相对定量。结果1．从扩增曲线看出，对照组卵巢癌细胞中RARαmRNA扩增起始时间晚，荧光值最低，随ATRA加药浓度逐渐增加，其扩增起始时间及荧光值逐渐增加，说明对照组卵巢癌细胞中RARαmRNA表达极低，ATRA干预后其表达增高，且在一定范围内随加药浓度增加而增高；而RXRαmRNA结果正相反，对照组卵巢癌细胞中RXRαmRNA扩增起始时间早，荧光值高，说明对照组卵巢癌细胞中RXRαmRNA表达较高，ATRA干预后其表达降低，且在一定范围内随加药浓度增加而降低。2．从标准曲线看到，起始模板浓度与Ct值之间呈良好的线性关系，说明定量结果准确、可靠。3．将各干预组相对定量与对照组进行比较得出，各干预组的细胞中，RARαmRNA的表达与对照组相比均升高，当浓度达10μmol／L时，差异有显著意义(P=0.002，)，且在一定浓度范围内，随加药浓度增加，RARαmRNA的表达亦有所增加。与此相反，各干预组的细胞中，RXRαmRNA的表达与对照组相比均降低，且均有统计学意义(P＜0.001)，随药物浓度增大，RXRαmRNA的表达逐渐降低。讨论RARαmRNA在卵巢癌COC2细胞中的基础含量极低，经ATRA干预后，RARαmRNA的表达可上调(F=5.814，P=0.011)，当ATRA浓度达10μmol／L时，差异有显著意义(P=0.002)，这种受体表达的上调激活了核受体产生ATRA的生物效应，因此可认为维甲酸对卵巢癌敏感细胞株产生作用是通过RARα受体而实现的，RARα可能是研究维甲酸对卵巢上皮性癌的作用机制的最好标志物之一；而RXRαmRNA基础含量极高，经ATRA干预后其表达减少(F=115.275，P＜0.001)，与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.001)，随药物浓度增大，RXRαmRNA的表达逐渐降低。这一受体表达改变是否与癌细胞内缺乏RARα，使RXRα代偿性增加而形成RXRα／RXRα同二聚体进行弥补有关，在天然的维甲酸化合物中，ATRA或9-cis-RA(9顺式维甲酸)均能激活RAR，而只有9-cis-RA可同时激活RXR，我们是否可以认为，由于ATRA仅为RAR的有效配体，随ATRA浓度的增加，RARα的表达逐渐增加，故需要越来越多的RXRα与之结合形成异二聚体束发挥生物效应，因此，RXRα的表达逐渐减少。这一分析是否能解释RXRα的表达变化尚有待于进一步研究。总之，ATRA可通过上调RARα及下调RXRα的表达来更大限度的发挥其抑癌作用。