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I型糖尿病是一种自身免疫疾病，口服其自身抗原可以作为治疗I型糖尿病的一种途径。为探索人胰岛素基因在乳酸菌中的表达及其用作口服疫苗的可行性，本研究将人胰岛素基因的密码子替换为乳酸菌偏爱密码子，同时在A，B链序列间加入含有8个氨基酸残基的连接短肽序列以利于形成β转折，用引物退火拼接法人工合成人胰岛素基因。将合成的人胰岛素基因亚克隆到带有启动子P59和信号肽SpUsp45的中间载体pSW201上，最终构建得到乳酸菌分泌表达载体pSW501。将pSW501转化至Lactococcus lactis MG1363和Lactobacillus casei ATCC27092中，表达带有信号肽SPUsp45的人胰岛素基因。Western blotting检测显示重组胰岛素几乎全部位于细胞壁上，细胞质和培养基中均未检测到表达产物。当菌体生长到OD600为0.4时表达产物达到最大量，表明重组胰岛素的表达主要集中于对数生长期。用含有表达重组胰岛素的Lactobacillus caseiATCC27092菌体口服喂饲非肥胖糖尿病(NOD)小鼠，发现能使NOD小鼠血清中与免疫耐受相关的细胞因子IL-4水平明显升高(38.583±2.083 pg/ml，P<0.05)，同时可刺激NOD小鼠产生SPUsp45-INS特异性抗体。糖耐受检测结果显示，NOD小鼠对葡萄糖的耐受能力增强。上述实验结果说明，表达人胰岛素的Lactobacillus caseiATCC27092能诱导NOD小鼠产生口服耐受，产生保护作用。