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目的:研究来氟米特活性代谢产物A77 1726对体外培养的人关节滑膜细胞产生白介素—18(IL-18)的影响及其产生药学作用的机制,探讨来氟米特在治疗类风湿性关节炎(RA)中的作用。 方法:本研究采用RA关节置换术滑膜标本5例,所有病例诊断均符合美国风湿病学会(ACR)1987年修订的类风湿性关节炎分类标准。同时收集正常关节滑膜标本3例作为正常对照。用胶原酶消化培养法培养原代细胞,本实验采用3—8代Ⅱ型滑膜细胞(成纤维细胞样滑膜细胞),选取光镜下观察生长状态良好的Ⅱ型滑膜细胞。用MTT法检测不同浓度A77 1726对体外培养的滑膜细胞细胞活力的影响,筛选药物浓度。实验共分9组,空白对照组、脂多糖(LPS)刺激分泌组、不同浓度A77 1726作用组3组、不同浓度A77 1726加尿嘧啶作用组3组、MTX药物对照组。在48小时用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测培养上清中IL-18分泌变化情况。用免疫组化的方法检测滑膜细胞内IL-18的含量。结果用SPSS12.0统计软件进行统计学分析。 结果:1.免疫组化染色显示RA Ⅱ型滑膜细胞较NC滑膜细胞胞浆内IL-18表达增高;2.RA病人关节滑膜细胞培养上清中IL-18水平明显高于正常人的IL-18水平;3.来氟米特活性代谢产物A77 1726对体外培养的人关节滑膜细胞分泌IL-18有抑制作用,并呈浓度依赖性;4.来氟米特抑制IL-18分泌的作用可在低浓度下(<90μg/ml)被尿嘧啶阻止,而在高浓度下无此作用;5.在作用48小时、浓度不高于130μg/ml,来氟米特对细胞活力没有影响。 结论:IL-18在RA病人的滑膜细胞和滑膜细胞培养上清液中高表达,证明它参与了RA的病理过程;来氟米特活性代谢产物A77 1726抑制IL-18的产生,