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目的：构建含有肌球蛋白重链增强子(myosin heavy chain enhance,MHC)的心肌特异性启动子人脑钠肽启动子(Human brain natriuretic peptide promoter, hBNP)和人硫氧还蛋白还原酶2基因(Human thioredoxin reductase2)的腺相关病毒载体(adeno-associated virus, AAV)的重组质粒pAAV2.1-MHC-BNP-TR2-Myc,并分别包装AAV6和AAV9,分别转导293细胞和乳鼠原代心肌细胞,观察其在心肌细胞上的表达。方法：1. pAAV2.1-MHC-hBNP-TR2-Myc质粒的构建：将现有的pAAV2.1-MHC-BNP-lacZnls质粒进行酶切鉴定获得pAAV2.1-MHC-BNP启动子,将含有目的基因TXNRD2的质粒进行酶切、PCR扩增及胶回收获得TR2-Myc基因,然后将pAAV2.1-MHC-hBNP启动子与TR2-Myc基因进行进一步的酶切连接后得到重组质粒pAAV2.1-MHC-BNP-TR2-Myc.2. rAAV-MHC-hBNP-TR2-Myc病毒构建将pAAV2.1-MHC-hBNP-TR2-Myc及包装质粒(pAAV6. pAAV9)及辅助质粒(pHelper)以PEI法行三质粒共转染293细胞,并对病毒进行纯化及病毒滴度和纯度的检测。用Dot Blot检测病毒滴度,用十二烷基磺酸纳-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis, SDS-PAGE)检测病毒纯度。3. MHC-hBNP启动子、TXNRD2基因的表达活性以及rAAV6-MHC-hBNP-TR2-Myc病毒包装功能的验证通过将重组病毒rAAV6-CMV-TR2-Myc转染293细胞,48小时后行DAB染色、DAPI染色以及DAB+DAPI染色,并设立空白对照组,分别观察其表达情况,并于转导48小时后收集细胞提取蛋白行WesternBlot检测。结果：1、成功构建了pAAV2.1-MHC-hBNP-TR2-Myc重组质粒。2、pAV2.1-MHC-hBNP-TR2-Myc能在293细胞表达。3、成功的包装了rAAV9-MHC-hBNP-TR2-Myc和rAAV6-MHC-hBNP-TR2-Myc病毒,病毒滴度不低于1012个/m1。4、rAAV6-MHC-hBNP-TR2-Myc病毒转导乳鼠原代心肌细胞能表达。结论：成功构建了含有a-MHC-hBNP启动子和TR2基因的重组腺相关病毒载体的包装质粒(pAAV-MHC-hBNP-TR2-Myc),并包装rAAV9-MHC-hBNP-TR2-Myc和rAAV6-MHC-hBNP-TR2-Myc三种病毒,同时,rAAV6在体外转导原代心肌细胞,TR2-Myc基因能正常表达,为进一步rAAV9体内基因治疗心脏缺血再灌注损伤打下坚实的基础。