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作为精子和卵子的前体细胞,禽类的原始生殖细胞(Primordial Germ Cells,简称PGCs)在生产转基因鸡和保存濒危物种的遗传资源中具有广阔的应用前景,而建立一个能使禽类PGCs有效增殖和传代的体外培养系统是这些应用的前提条件。黄羽鸡是我国重要的肉鸡品种,在广西及中国南方各省广泛养殖。为了更好的保护和利用这一地方家禽品种资源,本研究尝试从黄羽鸡分离PGCs,建立黄羽鸡PGCs的体外培养体系,并探索利用这一细胞工具进行黄羽鸡基因修饰的可能性。从黄羽鸡鸡胚血液或性腺中分离PGCs,与MEF或BRL饲养层直接接触培养或在BRL饲养层存在时,在细胞培养小室中培养。结果表明,跟直接和饲养层接触培养的PGCs相比,经细胞培养小室培养的PGCs的增殖速度更快,可以获得高达33%(1/3)的建系成功率。尽管最初是从多个混合性别的鸡胚分离而来,但是最终建系的每个PGCs株都是雄性而表现出雌性PGCs的缺失,这间接表明体外培养的雄性PGCs比雌性PGCs增殖得快。这些PGCs经长期体外培养后仍呈AP染色阳性。免疫荧光染色分析显示这些PGCs表达生殖细胞相关的标记物 SSEA-1 和 EMA-1。RT-PCR 分析表明它们表达 Nanog、PouV、CVH、CDH和DAZL这些多能性基因。PKH26标记的体外培养两个月的PGCs仍能定居到性腺。然后用脂质体LTX&PLUS试剂将构建在转座子质粒中的GFP基因导入培养的PGCs中,得到8.5%的转基因效率。用嘌呤霉素筛选GFP阳性的PGCs,并将这些阳性细胞注射到13～15期的鸡胚血液中,结果发现,这些遗传修饰后的PGCs仍能迁移到性腺。总之,本研究成功分离出黄羽鸡PGCs并建立了一套黄羽鸡PGCs的体外长期扩增培养的方法。这些PGCs不仅能在体外有效增殖,表达所有测试的标记物而且即使在进行遗产修饰后,还具有较高的性腺定居能力。因而,本研究分离获得的黄羽鸡PGCs将为地方家禽品种遗传资源的保存及生物育种提供一套有用的细胞平台。