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本研究根据sp561上第三个Shshi结构域设计两条引物,以本实验室已构建的大鼠sp561的cDNA载体为模板PCR扩增出sp56-lost片段,通过pGEX-4T-3上的多克隆酶切位点,把两个sp56-lost片段串联起来定向克隆到pGEX-4T-3载体上。用IPTG诱导原核表达,筛选后,用谷胱甘肽-琼脂糖树脂亲和纯化,得不到可溶目的蛋白。
本工作成功制备了大鼠sp56s缺失肽(sp56-lost)的抗体,为进一步研究大鼠sp56两种变异体的功能和分布奠定了基础,同时本次实验得到的sp56s缺失肽抗体能为以后精卵结合过程的研究提供一个很好的时空定位标记。