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己烯雌酚和双烯雌酚是结构相近的人工合成的非甾体雌酚类激素,临床上用于补充体内雌激素不足,治疗乳腺癌、前列腺癌、闭经和绝经期综合症等,并能够促使女性器官及副性征正常发育,促使子宫内膜增生,增强子宫收缩,提高子宫催产素的敏感性;小剂量刺激垂体前叶促性激素及催乳素的分泌,大剂量则起到抑制作用。双烯雌酚是己烯雌酚的体内代谢产物。在畜牧业中,己烯雌酚和双烯雌酚主要用于牛奶产量、促进蛋白质合成,具有增加蛋白质沉积和减少脂肪沉积的作用。长期使用己烯雌酚和双烯雌酚或食用含有己烯雌酚和双烯雌酚的奶制品或肉制品会导致妇女更年期紊乱、生育能力下降、女性性早熟、男性女性化,并能导致女性产生乳腺癌、子宫癌等。因此建立方便、快捷的己烯雌酚和双烯雌酚检测方法具有重要意义。
在碱性介质中,Ag(Ⅲ)配合物氧化鲁米诺产生稳定的化学发光信号,某些物质能显著增强或抑制鲁米诺-Ag(Ⅲ)体系的化学发光,并且发光强度与物质浓度在一定范围内呈良好的线性关系。本试验将Ag(Ⅲ)-鲁米诺化学发光新体系与流动注射技术相结合,建立了检测己烯雌酚的新方法,并将此方法应用于己烯雌酚片剂的含量测定。
毛细管电泳将电泳技术与现代微柱分离技术相结合,以高压直流电场为驱动力,在毛细管中按各组分的淌度和分配行为的不同进行高效、快速的分离。毛细管电泳的分离通道为中空的毛细管,对样品的预处理要求较低,本研究旨在建立毛细管电泳法测定育发产品中己烯雌酚和双烯雌酚。
一、流动注射-Ag(Ⅲ)-鲁米诺化学发光新体系测定己烯雌酚片剂中己烯雌酚含量
目的:建立流动注射-Ag(Ⅲ)-鲁米诺化学发光新体系测定己烯雌酚片剂中己烯雌酚含量的新方法。
方法:在碱性条件下,鲁米诺被Ag(Ⅲ)氧化产生稳定的化学发光信号,己烯雌酚能显著抑制Ag(Ⅲ)-鲁米诺体系的化学发光作用,且发光强度与样品的浓度在一定范围内呈良好的线性关系。通过对鲁米诺溶液浓度、碱度和Ag(Ⅲ)溶液浓度、碱度等一系列发光条件进行优化选取,在最佳发光条件下绘制己烯雌酚的标准曲线,并对样品进行含量测定。
结果:流动注射-化学发光法测定己烯雌酚的最低检出限为3.0×10-7mol/L。线性范围为5.0×10-7-5.0×10mol/L,回归方程为△I=5.84×108C+548,线性相关系数r=0.9989。对1.0×10-5mol/L的己烯雌酚连续进行平行测定7次,RSD为3.4％,加标回收率在88.6％-100.0％之间,RSD为3.7％。
结论:流动注射化学发光法测定己烯雌酚片剂中己烯雌酚含量,方法简便快捷、准确可靠,可用于己烯雌酚片剂生产过程己烯雌酚的质量控制。
二、毛细管电泳法测定育发产品中的己烯雌酚和双烯雌酚
目的:建立毛细管电泳-紫外检测法测定育发产品己烯雌酚和双烯雌酚含量的新方法。
方法:采用未涂层弹性熔融石英毛细管(75μmi.d.×55 cm,有效长度50cm)为分离通道,20mmol/L硼砂(含体积分数为30％的N,N-二甲基甲酰胺)为运行缓冲液,采用重力进样,进样时间10s,分离电压为20kv,紫外检测波长254nm。
结果:己烯雌酚和双烯雌酚在9min内达到基线分离,在2.0×10-6-2.0×10-4mol/L,2.0×10-6-2.0×10-4mol/L浓度范围内呈良好的线性关系,线性相关系数分别为0.9991、0.9994,检出限为6.7×10-7mol/L和3.3×10-7mol/L,回收率分别在89.6-94.6％和88.7-104.8％之间,相对标准偏差为3.97％和4.54％。
结论:该方法简便、快速、准确,用于市售育发产品中己烯雌酚和双烯雌酚的检测,结果令人满意。