NPHP-8对线虫纤毛形态和功能的影响及INS-1细胞囊泡胞吐胞吞偶联的研究

来源 :华中科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangjian_heu
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本文主要包括两个方面的内容:  (1)线虫nphp-8基因的研究  肾耗竭(Nephronophthisis)是一种在小孩和青年时期最常见的晚期肾功能衰竭遗传性疾病。至今,已经发现有10个与之相关的基因(NPHP1-9 and NPHP11)。NPHP8/RPGRIP1L是在Joubert syndrome(JBTS)和Meckel syndrome(MKS)中发现的一个新的纤毛基因。但是,NPHP8的精确功能和它的突变是怎样引起人的这类疾病都是未知的。本文,我们研究了线虫的nphp8同源基因并探讨了它在感觉神经元纤毛的功能。通过RACE分析,我们第一次确定了nphp-8的基因结构,并发现了其启动子区存在明显的X-box序列。另外,NPHP-8与NPHP-4在纤毛过渡区有相互作用,nphp-8基因缺失的线虫表现出不正常的染料吸收和趋化性的缺陷。本课题揭示了nphp-8/RPGRIP1L在纤毛的形态和纤毛介导的趋化性上的重要作用。  (2)胞吐偶联的胞吞研究  本课题主要是利用全内反射荧光显微镜(TIRFM),通过转染胞吐和胞吞相关的荧光标签,来研究囊泡分泌和笼形蛋白(clathrin)依赖的胞吞之间的时空关系。我们发现葡萄糖依赖的胞吞相关的笼形蛋白或者dynamin-1能在囊泡分泌之前或者之后聚集,并介导笼形蛋白依赖的快速或者慢速胞吞。通过囊泡回收的膜蛋白Syt7(Synaptotagmin7),我们也证实了笼形蛋白的聚集和消失确实与囊泡对它的内容物回收相关。增强刺激和dynamin-1的去磷酸化不仅能增加胞吐偶联胞吞的百分比,而且也能增强胞吞相关蛋白在胞吐位点上的结合和解聚。基于我们的这些研究,我们在胰腺β细胞上揭示了胞吞与胞吐之间的关系,这也可以为研究神经突触上囊泡的回收提供一定的依据。
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