微卫星DNA呈串联重复状分布于整个生物体基因组中并且具有高度的变异性,可以产生出很多等位基因,等位基因之间呈共显性遗传,遗传方式符合孟德尔遗传定律,能够稳定地在亲代与子代之间传递,同时自然选择对其影响较小,因而被广泛地应用于物种遗传多样性研究,遗传连锁图谱构建,系统发生构建,父权鉴定等领域。本研究将通过探针杂交微卫星片段构建微卫星DNA富集文库的方法来筛选杂色山雀指名亚种的微卫星位点。选用杂色山雀指名亚种个体基因组进行微卫星筛选实验。通过与生物素标记的(AC)15探针进行杂交,最终获得68个阳性克隆,成功设计合成了 1 1对引物,其中有7对引物能够得到稳定特异的扩增。使用48个杂色山雀个体对筛选得到的7个微卫星位点进行鉴定,其中4个位点具有较高的多态性。等位基因个数(K)从11-17不等,平均等位基因个数为13.5;期望杂合度(He)在0.751-0.851之间,平均期望杂合度为0.819;多态信息含量(PIC)在0.728-0.823之间,平均多态信息含量为0.793。所获得的微卫星位点(b11,H6,b3;去掉观测杂合度稍低的位点c5)结合之前交叉扩增获得的 7 个位点(Pava09,Pava10,Pava14,Pmal79,Pma22,Pma48,Pocc06)共同对2013年杂色山雀繁殖巢的婚外父权进行判定。12个繁殖巢共98个个体在选取的10个微卫星位点上显示出很好的多态性,平均期望杂合度为0.816;平均多态信息含量为0.796;非父排除率1为99.97%;非父排除率2达到99.99%;证明了选取的10个微卫星位点可以准确地对杂色山雀种群进行父权鉴定。父权鉴定结果显示:12个繁殖巢内有5巢具有婚外子代(41.67%);全年74个子代中共有11个婚外子代(14.86%)。本研究的婚外父权结果与之前仅仅使用交叉扩增方法获得的微卫星位点进行的父权判定结果相似。但是,通过我们的实验不仅丰富了杂色山雀指名亚种的遗传信息,同时也为其它近缘种的微卫星交叉扩增提供新的参考,而且也有利于杂色山雀亚种群之间的遗传多样性以及婚外父权比例的研究与分析。