论文部分内容阅读
目的：系统研究慢性高眼压视网膜五个线粒体复合物活性及氧化应激状态的动态变化,探索高眼压视网膜氧化损伤机制。方法：在体内实验中采用两种慢性动物模型,一种为挪威鼠前房注射磁珠诱导慢性高眼压,另一种为色素播散性青光眼模型DBA/2J小鼠。分别在眼压升高不同时间取视网膜,制备组织匀浆。在体外实验中将星形胶质细胞加压培养,压力设为30mmHg,模拟慢性高眼压。分别在加压后不同时间点收集细胞,制备细胞匀浆。生物化学方法检测五个线粒体复合物活性及总SOD活性,Cu,Zn-SOD活性,Mn-SOD活性,MDA及ROS含量变化。使用SPSS16.0统计软件分析处理数据。结果：1.90%实验组挪威鼠经磁珠前房注射后眼压稳定升高。2.高眼压导致视网膜线粒体复合物活性改变①挪威鼠ⅰ.9周龄组线粒体复合物Ⅰ的活性在高眼压后前4周时主要呈现下降趋势(p<0.05),到第4周时达最低值为0.0333±0.0056μmol·min·mgpro-1(p<0.001),之后逐渐回升,到高压后6周时接近正常值为0.1071±0.0056μmol·min·mgpro-1;22周龄组线粒体复合物Ⅰ的活性在高眼压后整体呈现上升趋势,于高压后第4周时达最高值为0.2485±0.0029μmol·min·mgpro-1(p<0.05),之后迅速回降,到高压后6周时降至0.0800±0.001μmol·min·mgpro-1,接近正常值。ⅱ.两年龄组线粒体复合物Ⅱ活性在高眼压后均降低,9周龄组于第2周降至最低值为0.0143±0.0003μmol·min·mgpro-1(p<0.001);而22周龄组于第1周即降至最低为0.0092+0.0023μmol·min·mgpro-1(p<0.05),其后虽有所回升,但仍显著低于正常值(p<0.05)。ⅲ.两个年龄组线粒体复合物Ⅲ活性在高压后第一周即迅速下降,分别降低了63.06%,80.04%(p<0.001),之后随着加压时间的延长其活性逐渐回升,到第6周时均显著高于正常值,分别为0.0694±0.0000(p<0.05)和0.0599±0.0022(p<0.001) μmol·min·mpro-1。ⅳ.9周龄和22周龄组线粒体复合物Ⅳ活性在高眼压后前3周均逐渐升高,到第3周时升至最高,分别为0.1294+0.0076和0.1249±0.0126μmol·min-1·mg-1(p<0.001),之后迅速回降,到高压6周时分别为0.0330±0.0033和20.0263±0.0031μmol·min·mgpro-1,仍显著高于正常值(p<0.05)ⅴ.9周龄组线粒体复合物V的活性在高眼压后持续缓慢下降,到高压6周时已降低了65.63%(p<0.001)；而22周龄组线粒体复合物V的活性在眼压升高后即缓慢升高,到第4周时是对照组的1.3倍(p<0.05),其后迅速下降,到第6周时已降低了68.80%,显著低于正常对照组(p<0.05)。②DBA/2Jⅰ.线粒体复合物Ⅰ活性升高(p<0.001)。ⅱ.复合物Ⅱ-Ⅴ活性均降低(p<0.01)。③体外加压的星形胶质细胞ⅰ.复合物Ⅰ-Ⅳ活性加压后均降低,其中复合物Ⅱ跟Ⅳ持续缓慢下降,而Ⅰ、Ⅲ迅速大幅度降低,在加压24小时时已分别降低了88.66%(p<0.001),68.39%(p<0.01)。然而复合物Ⅰ的活性之后缓慢回升,到第6周时升至0.4236±0.0018μmol·min·mgpro-1,但仍显著低于正常值(p<0.001)；而复合物Ⅲ的活性仍持续降低,到加压96小时时达最低值(下降了82.11%,p<0.01)。ⅱ.复合物V活性随加压时间逐渐升高,到加压120h时升高了7.69倍(p<0.001)。3.高压下Mn-SOD活性持续显著下降。①挪威鼠22周龄组挪威鼠T-SOD及Cu,Zn-SOD活性在高压前2周时分别升至71.9914±0.0025(p<0.001),65.1074±3.9882(p<0.01)U/mgprot,在高压3周及4周时又迅速降低,但到高压6周时分别再次升高至72.1602±0.0006(p<0.001),68.5408±0.2388(p<0.01)U/mgproto而Mn-SOD活性在加压过程中持续下降,到第6周时已降低了75.36%(p<0.05)。同时MDA含量随T-SOD活性变化而变化。到高压第2、4、6周时分别增加了2.03倍(p<0.001)、0.93倍(p<0.001)、1.48倍(p<0.001)。9周龄组挪威鼠T-SOD活性在高压前2周时分别降低了24.65%(p<0.001)、69.29%,从高压第3周期活性开始回升,但第3、4周时仍显著低于正常值,分别降低了38.35%(p<0.001)、28.78%(p<0.001),到高压第6周时其活性才显著高于正常值,为76.5028±1.2215(p<0.05)U/mgproto同时MDA含量随T-SOD活性变化而变化。到高压第4、6周时已分别增加了57.58%(p<0.01)、92.16%(p<0.05)。②DBA/2J和C57BL/6T-SOD, Cu,Zn-SOD, Mn-SOD活性分别降低了10.77%,10.49%,43.29%(p<0.05),MDA含量下降了19.44%(p<0.05)。③体外加压的AST-SOD, Cu,Zn-SOD, Mn-SOD活性,MDA含量均持续下降。4.视网膜内ROS含量增加。结论：1高眼压导致线粒体复合物活性异常,视网膜内存在氧化应激。2不同鼠龄视网膜线粒体复合物活性对压力损伤的反应性和代偿能力不尽相同。变化特点不尽相同。3压力作用下,线粒体内Mn-SOD损伤较早较严重,导致线粒体内较早出现氧化失衡。4线粒体复合物Ⅲ是慢性高眼压视网膜内ROS产生的主要部位。